2008-09-19
org.kosen.entty.User@456d81c9
이응지(witch83)
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여러 sample에 의한 한가지 protein의 발현을 알아보기 위하여 동일한 조건으로 실험을 진행해오고 있습니다.
실험 초기에는 잘 보이던 band가 갈수록 희미하게 나타나서 고민중인데요..ㅠ_ㅠ
초기에 잡은 조건으로 나름대로 동일하게 실험을 진행하고 있었기 때문에 뚜렷한 원인을 찾지 못하고 있던 중,,현상액의 색이 처음과는 다르게 갈색빛을 띄고 있는 것을 발견하게 되었습니다..;;
(전에 다른 실험실에서는 현상기로 자동 현상을 해서, 수동 현상에 대해서는 많이 서투릅니다)
혹시, 현상액이 산화가 되어 색이 변하면 이런 현상이 나타나기도 하는지 궁금합니다.
이 외에도 다른 의심스러운 부분이 있다면 조언 부탁드립니다~
- film
- developer
- western blot
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답변 3
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답변
김은민님의 답변
2008-09-19- 0
primery antibody를 한번 희석하여 사용한 것을 계속 사용하신것은 아니신가요? membrane에 primery antibody가 binding하는 단백질이 많다면, 사용하실때마다, primery antibody가 depletion되어 signal이 점점 약해지기도 합니다. 만약, 계속 사용하셨다면, primery antibody를 다시 dilution해보시기 바랍니다. 혹은, film의 수명이 지난 것을 사용하시고 계시진 않는지 다시 확인해보세요~ ^^ 건승을 빕니다. >여러 sample에 의한 한가지 protein의 발현을 알아보기 위하여 동일한 조건으로 실험을 진행해오고 있습니다. > >실험 초기에는 잘 보이던 band가 갈수록 희미하게 나타나서 고민중인데요..ㅠ_ㅠ > >초기에 잡은 조건으로 나름대로 동일하게 실험을 진행하고 있었기 때문에 뚜렷한 원인을 찾지 못하고 있던 중,,현상액의 색이 처음과는 다르게 갈색빛을 띄고 있는 것을 발견하게 되었습니다..;; >(전에 다른 실험실에서는 현상기로 자동 현상을 해서, 수동 현상에 대해서는 많이 서투릅니다) > >혹시, 현상액이 산화가 되어 색이 변하면 이런 현상이 나타나기도 하는지 궁금합니다. > >이 외에도 다른 의심스러운 부분이 있다면 조언 부탁드립니다~ > -
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이응지님의 답변
2008-09-19- 0
primary Ab는 항상 새로 희석하여 사용하기 때문에 문제는 없을 것 같구요,, 현상액과 film 상태를 다시 한번 점검해보아야 할 것 같군요~ 두 분 조언 감사합니다^^ -
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이의진님의 답변
2008-09-19- 0
>여러 sample에 의한 한가지 protein의 발현을 알아보기 위하여 동일한 조건으로 실험을 진행해오고 있습니다. > >실험 초기에는 잘 보이던 band가 갈수록 희미하게 나타나서 고민중인데요..ㅠ_ㅠ > >초기에 잡은 조건으로 나름대로 동일하게 실험을 진행하고 있었기 때문에 뚜렷한 원인을 찾지 못하고 있던 중,,현상액의 색이 처음과는 다르게 갈색빛을 띄고 있는 것을 발견하게 되었습니다..;; >(전에 다른 실험실에서는 현상기로 자동 현상을 해서, 수동 현상에 대해서는 많이 서투릅니다) > >혹시, 현상액이 산화가 되어 색이 변하면 이런 현상이 나타나기도 하는지 궁금합니다. > >이 외에도 다른 의심스러운 부분이 있다면 조언 부탁드립니다~ > 정확한 상황을 알수는 없지만 developer가 색이 변하게 되면 현상하는데 좋지 않습니다. 빨리 탄다든지 sensitive가 떨어집니다. 그래서 실험 시에 새로이 만들어서 하는 것이 좋습니다.