2008-09-19
org.kosen.entty.User@2b449c7f
이경자(hereien)
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단백질 전기영동시
밴드 모양이 샤프하게 나오게 하는 방법중에
샘플 로딩 버퍼에다가
8m urea 를 넣어보라는데
왜죠? 그리고 넣는다면 어떻게 넣어야 하는지
(참고로 5x 샘플버퍼)
조성 비율 좀 알려 주십사 합니다.
- sds
- urea
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답변 1
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답변
김범수님의 답변
2008-09-22- 2
>단백질 전기영동시 >밴드 모양이 샤프하게 나오게 하는 방법중에 >샘플 로딩 버퍼에다가 >8m urea 를 넣어보라는데 >왜죠? 그리고 넣는다면 어떻게 넣어야 하는지 >(참고로 5x 샘플버퍼) >조성 비율 좀 알려 주십사 합니다. 전기영동시에 urea를 넣는 것은 단백질의 havy chain과 light chain의 결합을 끊어 밴드를 표시하고자 할 목적입니다. 즉 urea를 넣지 않는 밴드보다 낮은쪽에 두개의 밴드가 좀거 샤프하게 나타나긴 하는데요... 단백질 고유의 밴드를 원할경우는 넣지 않습니다. 밴드를 좀 더 샤프하게 하고 싶으시다면, loading buffer, running buffer등을 새롭게 만들고(오래된 버퍼의 contamination 가능성때문) 밴드 전개시간을 조금더 늘려 잡아서 밴드가 loading chamber 거의 하단까지 올때까지 전개시키시구요, 염색시간 보다는 탈색시간을 좀더 늘리면서 탈색시 색소제거를 목적으로 담궈두는 킴와이프스를 자주 갈아주는 것이 좋을거 같습니다. 혹은 loading sample의 양이 너무 많아서 밴드가 두텁게 나오는 경우도 있습니다. 참고하세요.