2008-10-22
org.kosen.entty.User@1e3a632d
최유성(usung22)
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안녕하세요..
고정상 컬럼을 만들려고 합니다. 현재 다당류에 관련된 실험을 하고 있습니다.
근데 요녀석을 분자량 별로 나눠야 사용하기 편하겠는데 쉽지가 않습니다.
분리하고자하는 당은 sodium alginate와 fucoidan입니다.
packing material은 무얼 사용해야하는지요??
solvent는 어떤걸 사용해야하는지요??
당에대한 고수들의 답변 기다리겠습니다.
감사합니다.
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
이상후님의 답변
2008-10-22- 0
>안녕하세요.. > >고정상 컬럼을 만들려고 합니다. 현재 다당류에 관련된 실험을 하고 있습니다. > >근데 요녀석을 분자량 별로 나눠야 사용하기 편하겠는데 쉽지가 않습니다. > >분리하고자하는 당은 sodium alginate와 fucoidan입니다. > >packing material은 무얼 사용해야하는지요?? > >solvent는 어떤걸 사용해야하는지요?? > >당에대한 고수들의 답변 기다리겠습니다. > >감사합니다. 고정상 컬럼을 제작하는것은 많은 경험과 숙련된 기술을 갖고 있어야 합니다. 고정상 컬럼을 제작하신다면 HPLC 컬럼을 말씀하시는건지요? 고정상 컬럼을 제작하기 위해서는 slurry packer가 있어야 되고 여러가지 유기반응이 필요합니다. 그리고 각 단계별로 packing material의 수율을 알아보기 위한 확인(elemental analyzer, mass spectrometry 등) 작업이 필요합니다. 따라서 고정상 컬럼을 제작하기 보다는 기존에 사용되고 있는 분리 시스템을 이용하시는 것이 어떨까 싶습니다. 경험상으로는 다당류를 분자량 별로 분리하고자 한다면 우선 anionic exchange chromatography에 DEAE-cellulose column상에서 일차적으로 정제를 하셔야 될 거 같습니다. 정제된 것이라면 이 스텝을 생략해도 될 거 같습니다. 이후 bio-LC 시스템에 연결된 high-performance size exclusion chromatography를 권장하고 싶습니다. 컬럼은 bio-LC 전용 SEC용 전용 컬럼을 사용하시고 유속은 대략 0.5 ~ 0.7 ml/min으로 사용하시기 바랍니다. Detector도 RID를 사용하시고 standard는 분자량 180에서 788000 Da 범위에 있는 pullulan를 사용하시어 체크해 보시기 바랍니다. Bio-LC system을 사용하지 않고 bactch에서도 가능한데 Sepharose-4B column상에서도 분리가 가능할 거 같습니다. Mobile phase는 water를 써도 될 듯 합니다. 이때 확인은 phenol–H2SO4 assay로 확인이 가능할 거 같습니다. Alginate의 경우는 agraose gel electrophoresis와 PAGE를 통해서 좀 더 정제할 수 있습니다. 굳이 packing material을 만드실 경우에는 우선 silica gel (particle size 1 ~ 5 um)에 linker를 부착시키는 유기반응이 필요합니다. 이 반응은 웹상에서 HPLC-stationary phase라는 키워드를 검색하면 몇개의 논문이 나올듯 합니다. 이후 ethanol에 suspension시킨후에 slurry packer를통해서 충진하시면 됩니다. -
답변
안길홍님의 답변
2010-01-29- 0
>안녕하세요..>>고정상 컬럼을 만들려고 합니다. 현재 다당류에 관련된 실험을 하고 있습니다.>>근데 요녀석을 분자량 별로 나눠야 사용하기 편하겠는데 쉽지가 않습니다.>>분리하고자하는 당은 sodium alginate와 fucoidan입니다.>>packing material은 무얼 사용해야하는지요??>>solvent는 어떤걸 사용해야하는지요??>>당에대한 고수들의 답변 기다리겠습니다.>>감사합니다. 첨부자료