2008-10-30
org.kosen.entty.User@72fe2157
백경은(sassy98)
- 3
요즘 cell 상태가 좋지 않고
계속 말썽을 부려서 고민하고 있는 생물학도입니다..
보통 culture할때 다들 HEPES 첨가하시나요??
보통의 배지조성에서 bicarbonate가 incubator 내에서의 buffering을 하고
(즉, 5%의 CO2 gas가 있을 때 buffering이 가능)
incubator 밖에서의 buffering은 HEPES 가 하는 것으로 알고 있습니다.
어떤 분들은 넣는게 buffering에 좋다고 하고
또 어떤 분들은 일부 cell 에서는 toxic 할 수도 있다고 하고..
계속 귀만 얇아지고 있는거같은데 확신은 없고..
알고계신 고수분들,,답변부탁드립니다 ㅠ_ㅠ
꼭 넣어야하는걸까요..
- cell culture
- HEPES
- pH
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
이배훈님의 답변
2008-10-30- 0
>요즘 cell 상태가 좋지 않고 >계속 말썽을 부려서 고민하고 있는 생물학도입니다.. > >보통 culture할때 다들 HEPES 첨가하시나요?? >보통의 배지조성에서 bicarbonate가 incubator 내에서의 buffering을 하고 >(즉, 5%의 CO2 gas가 있을 때 buffering이 가능) >incubator 밖에서의 buffering은 HEPES 가 하는 것으로 알고 있습니다. > >어떤 분들은 넣는게 buffering에 좋다고 하고 >또 어떤 분들은 일부 cell 에서는 toxic 할 수도 있다고 하고.. >계속 귀만 얇아지고 있는거같은데 확신은 없고.. >알고계신 고수분들,,답변부탁드립니다 ㅠ_ㅠ >꼭 넣어야하는걸까요.. > 버퍼링 효과는 좋은 빛에 노출시 과산화 수소 생성이 문제점이라고 하네요. Lepe-Zuniga et al. reported a phototoxicity of HEPES when exposed to ambient light by the production of hydrogen peroxide. For best repeatability of results it is then strongly advised to keep any HEPES containing solution in darkness as much as possible. from wikipedia -
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박수제님의 답변
2008-10-31- 0
제가 알고 있기로는 HEPES의 첨가유무는 cell을 좀더 오래 culture할 수 있냐?없냐? 의 차이인 것 같습니다. cell 상태가 좋지 않다면, 너무 오래 pass를 해서 그럴 수도 있을 것같구요. 아니면, serum의 농도를 달리 해보시던지... 아니면, 새로운 vial을 푸시는것이 좋을 것 같네요. >요즘 cell 상태가 좋지 않고 >계속 말썽을 부려서 고민하고 있는 생물학도입니다.. > >보통 culture할때 다들 HEPES 첨가하시나요?? >보통의 배지조성에서 bicarbonate가 incubator 내에서의 buffering을 하고 >(즉, 5%의 CO2 gas가 있을 때 buffering이 가능) >incubator 밖에서의 buffering은 HEPES 가 하는 것으로 알고 있습니다. > >어떤 분들은 넣는게 buffering에 좋다고 하고 >또 어떤 분들은 일부 cell 에서는 toxic 할 수도 있다고 하고.. >계속 귀만 얇아지고 있는거같은데 확신은 없고.. >알고계신 고수분들,,답변부탁드립니다 ㅠ_ㅠ >꼭 넣어야하는걸까요.. > -
답변
장성재님의 답변
2008-10-31- 0
님께서 이미 알고 계시듯이 HEPES는 저온 (4도씨)또는 CO2 incubator 외부에서 세포를 조작(reagents 반응)할때 bicarbonate에 의한 buffering이 잘 발휘되지 않을 때 사용하는 buffering 성분으로써 배지가 아닌 직접 HEPES buffer에 reagents를 희석/첨가하여 세포에 처리하기도 합니다. 단, 주의할 점은 HEPES는 빛과 반응하여 cytotoxicity (과산화수소 생성)를 나타낸다고 합니다. 하지만 일반적인 실험이나 배양 중에는 거의 영향이 없다고 보셔도 좋습니다. 따라서 배양할 때에는 특별히 첨가되지 않아도 일반적인 세포의 경우 문제가 없습니다. 어떤 세포를 배양하시는지 모르겠지만, 규정된 배지 (성분)와 매뉴얼을 사용하고 계신다면 배지에 문제가 있지는 않을 듯 싶군요. 윗분이 답해주신 대로 오랜/잦은 계대배양으로 인한 세포 자체의 노화(?) 또는 오염, 또는 다른 환경의 변화에 의한 것이 원인일 수 있으니 master cell bank에서 새롭게 cell을 풀어 사용하시는 것이 좋을 듯 싶습니다. 보통 세포주를 구입하신 후 관리하실 경우, master cell bank와 working cell bank를 구분하셔서 cell stock 해놓으시는 것을 권장드립니다. >요즘 cell 상태가 좋지 않고 >계속 말썽을 부려서 고민하고 있는 생물학도입니다.. > >보통 culture할때 다들 HEPES 첨가하시나요?? >보통의 배지조성에서 bicarbonate가 incubator 내에서의 buffering을 하고 >(즉, 5%의 CO2 gas가 있을 때 buffering이 가능) >incubator 밖에서의 buffering은 HEPES 가 하는 것으로 알고 있습니다. > >어떤 분들은 넣는게 buffering에 좋다고 하고 >또 어떤 분들은 일부 cell 에서는 toxic 할 수도 있다고 하고.. >계속 귀만 얇아지고 있는거같은데 확신은 없고.. >알고계신 고수분들,,답변부탁드립니다 ㅠ_ㅠ >꼭 넣어야하는걸까요.. >
Toxicity of light-exposed Hepes media. Lepe-Zuniga JL, Zigler JS Jr, Gery I. Journal of Immunological Methods. 1987 Oct 23;103(1):145.
In Vitro Cell Dev Biol. 1985 May;21(5):282-7.
Analysis of the cytotoxic effects of light-exposed HEPES-containing culture medium.
Zigler JS Jr, Lepe-Zuniga JL, Vistica B, Gery I.