KOSEN 한인과학기술자네트워크

> > 안녕하세요. > 면역염색(immunohistochemistry)실험과 관련하여 protocol을 작성하고 있습니다. > > 이전에 사용했던 방법은(조직, RAT) > 관류고정(perfusion)이후 wash, 1차 Ab. 2차 Ab 이런 방법이었는데요 > 기본이 되는 buffer는 PBS를 사용했습니다. > > 다른 프로토콜과 논문을 찾아보던중 > 어떤 논문들에서는 고정단계, 즉 관류고정 및 액침고정에서는 PBS를 베이스로한 고정액을 사용하고, 조직을 절단한 이후에 TBS를 사용하더군요. > > 물론 제가 이전에 해오던 방법에서는 모두 PBS 베이스로 했었고 결과도 나왔습니다만 특별히 PBS - > TBS를 이용하는 방법이 있는지요? > > 혹시나 immunoreativity 를 상실하지 않는다거나, 효율이 증가되는 장점이 있다면 이번에는 TBS buffer를 써볼까 합니다. > > PBS와 TBS의 차이점에 관해서 설명 부탁드려 봅니다. > > 감사합니다. 인터넷으로 찾아본 결과 pbs 가격이 저럼한 장점, alkarin phosphatase 사용시 간섭(phosphate) 이유로 tbs 사용 그외에는 결과의 큰 차이 가 없을 것 같음. 단 tbs는 온도에 따라 pH가 변화함 첨부 참고 TBS uses Tris as the buffer, and PBS uses phosphate as the buffer. They should give similar results. According to the Pierce's Western Handbook, you should choose PBS or TBS buffer according to your detection kit. If you use AP conjugated secondary antibody, you should use TBS, as PBS interefere with alkaline phosphatase. Carl, et al., Just one thing to add... Tris buffers change pH with temperature, Phosphate buffers do not. Sooo, if your antibody incubations are at different temps (4C overnight primary Ab vs. RT 30 min secondary), you'll need different Tris buffer solutions. bb. I've used both buffers for cell and section (vibratome, expoxy, cryostat and paraffin) IHC, for LM (fluorescence,DAB, NBT/BCIP) and EM (DAB, gold) and found no difference I could attribute to the buffer choice. The only consderations were switching to Tris for DAB development (force of habit) and prior to lead staining (avoid PB "pepper"). In all cases have used either buffer at 0.1M without saline or at 5-50 mM with 0.9% saline and at PH values from 6.9-7.8 depending on the protocol. My default is 10 mM PBS, 0.9% saline, pH 7.2, with 3x 10mM TBS washes for AP.