2008-11-27
org.kosen.entty.User@5f60b4d8
이승규(sklee0125)
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첫번째 질문
pRSET vector에서 "T7 gene 10 leader" 서열이 있던데,
이것의 역할은 무엇인가요?
만약에 이것을 제거했을 경우, 단백질 발현에 영향을 미치는가요?
두번째 질문
pET28a vector에 단백질 발현을 했는데,
IPTG를 넣어도 발현이 안되네요.
온도를 변화시켜도 잘 안되구요.
발현시킬 수 있는 좋은 방법이 있을까요?
- T7 gene 10 leader
- pRSET vector
- protein expression
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
김성우님의 답변
2008-11-28- 2
첫번째 질문.. T7 gene 10 leader --> protein stability를 증진시켜 준다고 하는 군요.. 이 sequence를 사용해서 mRNA level을 기존의 다른 leader sequence를 사용했을 때보다 100배 가량 증가시켰다는 내용을 봤던 것으로 기억합니다. protein stability와 관련된 것이기 때문에 없어도 target protein은 발현 시킬 수 있을 것으로 보이나, 정도의 차이는 있을 것으로 생각됩니다. 두 번째 질문.. 단백질이 발현이 안되는 문제는 일단 목적으로 하는 coding sequence가 올바르게 삽입되었느냐가 가장 큰 관건일 것 같군요. 온도를 낮추어서 발현하는 문제는 soluble expression과 관련된 문제이므로, 발현이 되는 단백질에 대해서 접근할 방법입니다. 따라서, sequencing 결과를 다시 한 번 확인해 보시기를 권합니다. >첫번째 질문 > >pRSET vector에서 "T7 gene 10 leader" 서열이 있던데, >이것의 역할은 무엇인가요? >만약에 이것을 제거했을 경우, 단백질 발현에 영향을 미치는가요? > >두번째 질문 > >pET28a vector에 단백질 발현을 했는데, >IPTG를 넣어도 발현이 안되네요. >온도를 변화시켜도 잘 안되구요. >발현시킬 수 있는 좋은 방법이 있을까요?
감사합니다^^