2008-12-01
org.kosen.entty.User@9494d75
이승규(sklee0125)
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stable cell line을 만들려고 합니다.
pCIN5에 수용체를 클로닝하였는데,
transfection할 때에
plasmid를 제한효소로 잘라서 linear하게 넣어야 할까요?
아니면 그대로 circular하게 넣어야 할까요?
- stable cell line
- transfection
- pCIN5 vector
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답변 3
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답변
장성재님의 답변
2008-12-02- 2
플라스미드를 이용하여 transfection을 할때 제한효소 등을 처리하여 linear 상태로 세포에 처리하는 경우는 없습니다. linear 상태의 플라스미드는 구조적으로 불안정하여 nuclease에 의해 쉽게 분해되어 버리므로 transfection 효율이 급감할 수 있습니다. 정제키트를 사용하여 분리한 플라스미드를 그대로 사용하시면 됩니다. 즉, lipofection 등의 방법을 이용하셔서 세포에 처리하시면 됩니다. Tranfection 후에 selection marker (neomycine resistance)에 의해 stable cell line을 screening하시면 됩니다. >stable cell line을 만들려고 합니다. > >pCIN5에 수용체를 클로닝하였는데, > >transfection할 때에 > >plasmid를 제한효소로 잘라서 linear하게 넣어야 할까요? > >아니면 그대로 circular하게 넣어야 할까요? -
답변
정철웅님의 답변
2008-12-02- 2
보통 동물 모델 같은 것을 만들경우는 잘라서 집어 넜습니다. 일반 세포주에 할 때는 western으로 보통 확인이 가능하기 때문에 그냥 넣기는 하지만 세포주가 잘 안 만들어질때는 잘라서 넣기도 합니다. >stable cell line을 만들려고 합니다. > >pCIN5에 수용체를 클로닝하였는데, > >transfection할 때에 > >plasmid를 제한효소로 잘라서 linear하게 넣어야 할까요? > >아니면 그대로 circular하게 넣어야 할까요? -
답변
김민경님의 답변
2008-12-02- 2
기본적으로 cell line 에서는 자르지 않고 그냥 넣습니다. transfection이 잘 안되는 경우인지 궁금하군요. 요즘은 transfection reagent 등이 잘 나와서 문제가 없을것 같네요 행운을 빕니다. >stable cell line을 만들려고 합니다. > >pCIN5에 수용체를 클로닝하였는데, > >transfection할 때에 > >plasmid를 제한효소로 잘라서 linear하게 넣어야 할까요? > >아니면 그대로 circular하게 넣어야 할까요?
감사합니다^^