2008-12-05
org.kosen.entty.User@766a951f
소은미(soeunmi)
- 3
MTT assay 실험 set up 중에 있는데요..
대장암세포(CT-26)와 위암(AGS)세포로 하는데..
첫째날 cell을 깔고
둘째날 sample을 처리하고
셋째날 MTT 시약 처리해서 540nm에서 측정합니다.
그런데..... 둘째날 샘플 처리하고 MTT 시약 처리하기전에 현미경으로 관찰하면 control과 샘플 처리한 것과 눈으로 차이가 확 나는데 막상 MTT시약 처리해서 보면 control과 별 차이가 없습니다.ㅠㅠ
또 3개wall에 반복 실험하는데 데이타 값이 일정하지 않고 다 틀립니다....
샘플이 문제라고 해도 control값은 일정하게 나와야하는데 각 wall마다 값이 다 틀리게 나와요...
PBS는 만들어서 PH 7.4정확하게 맞쳤구요
trypsin-EDTA는 CIBCO꺼 사서 PBS에 희석해서 사용했고
MTT 시약은 SIGMA꺼 M5655 thiazolyl blue tetrazolium bromide 사용했습니다.
MTT시약이 문제인가요??
다른곳에서 MTT 실험했었고 , sample 도 taxol 시약으로 했고,PBS가 이상한가 해서 다시 만들어서 해도 같고, 실험자가 문제인가 해서 바꿔서 해봐도 문제가 잡히질 않네요..
뭐가 문제인지 모르겠네요...
조언좀 부탁드립니다^^;
- mtt
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답변 3
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답변
이호용님의 답변
2008-12-05- 0
>MTT assay 실험 set up 중에 있는데요.. > >대장암세포(CT-26)와 위암(AGS)세포로 하는데.. >첫째날 cell을 깔고 >둘째날 sample을 처리하고 >셋째날 MTT 시약 처리해서 540nm에서 측정합니다. > >그런데..... 둘째날 샘플 처리하고 MTT 시약 처리하기전에 현미경으로 관찰하면 control과 샘플 처리한 것과 눈으로 차이가 확 나는데 막상 MTT시약 처리해서 보면 control과 별 차이가 없습니다.ㅠㅠ >또 3개wall에 반복 실험하는데 데이타 값이 일정하지 않고 다 틀립니다.... >샘플이 문제라고 해도 control값은 일정하게 나와야하는데 각 wall마다 값이 다 틀리게 나와요... > >PBS는 만들어서 PH 7.4정확하게 맞쳤구요 >trypsin-EDTA는 CIBCO꺼 사서 PBS에 희석해서 사용했고 >MTT 시약은 SIGMA꺼 M5655 thiazolyl blue tetrazolium bromide 사용했습니다. > >MTT시약이 문제인가요?? >다른곳에서 MTT 실험했었고 , sample 도 taxol 시약으로 했고,PBS가 이상한가 해서 다시 만들어서 해도 같고, 실험자가 문제인가 해서 바꿔서 해봐도 문제가 잡히질 않네요.. >뭐가 문제인지 모르겠네요... >조언좀 부탁드립니다^^; 실험 하신다고 고생이 많으시네요 혹시 실험실에 luminometer가 있다면 P사에서 나온 Cell viability assay kit 한번 써 보시는 것도 좋으리라 생각이 듭니다. 저희 실험실에서도 처리하는 샘플에 따라 MTT 값이 많은 차이를 보이던 일이 있었는데, luciferase를 이용한 방법을 통해 해결했습니다. -
답변
한재석님의 답변
2008-12-08- 0
MTT는 cell내 mitochondria의 activity를 측정해서 특정 물질의 cellular toxicity를 알아내는 방법입니다. 만약 원하는 물질이 mitochondria의 activity에 영향을 미친다면 MTT assay는 이용하지 않는 것이 좋습니다. 차라리 세포내 ATP를 측정하는 방법이 더 좋을 때도 많이 있습니다. 요즘 좋은 kit들이 많으니 그걸 이용해 보시면 좋을 듯 싶습니다. -
답변
신재욱님의 답변
2009-01-16- 0
CT-26과 AGS세포주의 특성을 정확하게 모르겠으나, suspension cell의 경우 MTT처리 후 원심분리를 하셔야 실험적 오차를 줄일 수 있습니다. Anchorage cell도 원심분리하시면 오차를 현격히 줄일 수 있습니다. 원심분리는 약 1000rpm에서 5분이상하시면 됩니다.