2008-12-09
org.kosen.entty.User@6051a678
김정근(baramnamoo)
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간단히 말씀을 드리자면.
제가 Pseudomonas sp.의 competent cell을 만들어
electroporation으로 transformation을 하고자 합니다.
알고 싶은 것은
1. E.coli랑 Pseudomonas sp.의 com.cell 만드는 방법이 같은지
아니면 종마다 다른 규칙이나 방법이 있는지 알고 싶습니다.
2. electroporation용 com.cell은 특이한? 방법으로 제작을 한다는데
(저희는 heat shock용 CaCl2 method를 주로씁니다.)그 방법을 제대로 알고싶습니다.
좋은 답변 부탁드립니다.
- competent cell
- pseudomonas
- electroporation
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
오현아님의 답변
2008-12-09- 0
제가 쓰던 E.coli c.cell방법입니다. 1.Cell을 seed하여 0.5(OD600)까지 키우고,harvested된 broth를 ice에 ~20min Chill시킨다. 2.4000g 15min 4℃ 에서 spin down 3.미리 chilling 해둔 10% glycerol로(1의 L-Broth의 volume)resuspend pellet->4000g 15min 4℃ 에서 Centrifuge. 4.ice-cold 10% glycerol로 (3의 L-Broth의 1/2volume) resuspend pellet ->4000g 15min 4℃ 에서 Centrifuge. 5.ice-cold 10% glycerol(4℃) 로 ~20ml resuspend pellet ->4000g 15min 4℃ 에서 Centrifuge. 6.10% glycerol(4℃)로 1~2ml resuspend pellet후 chilling된 1.5ml tube에 분주후 -70℃보관.(conc.1~3x 1000cell/ml) 저희 lab에선 CaCl2방법과 다르게 제작하여 쓰고 있습니다. 도움이 되셨음하네요. >간단히 말씀을 드리자면. >제가 Pseudomonas sp.의 competent cell을 만들어 >electroporation으로 transformation을 하고자 합니다. >알고 싶은 것은 >1. E.coli랑 Pseudomonas sp.의 com.cell 만드는 방법이 같은지 >아니면 종마다 다른 규칙이나 방법이 있는지 알고 싶습니다. >2. electroporation용 com.cell은 특이한? 방법으로 제작을 한다는데 >(저희는 heat shock용 CaCl2 method를 주로씁니다.)그 방법을 제대로 알고싶습니다. > >좋은 답변 부탁드립니다.