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지식나눔

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HPLC 분석 질문입니다...

2008-12-31 org.kosen.entty.User@693cbd47 김은희(eunny85)
  • 2

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제가 지금 사용하는 컬럼은 Xterra이구요. 시마즈 semi-prep LC를 사용하고 있습니다. 이동상은 Sodium heptanesulfonate, sodium dihydrogenphosphate를 넣은 물과 아세토나이트릴을 사용하고 pH는 2.1로 맞춥니다. 분석하고자 하는 물질은 S-allyl L cysteine 이구요. 이외에 비슷한 구조의 물질들을 분석합니다. 그런데 분석 도중 내내 retention time이 일정하지 않고 압력 또한 불안정해서 전문가한테 여쭤보니 이 이동상은 ion pair 방법으로 컬럼의 온도 유지가 중요하다고 하더군요. 근데 제가 사용하고 있는 LC는 컬럼 오븐이 없어요 ㅠ -해결할수 있는 방법이 무엇이 있을까요? -아니면 capillary chromatography, ion exchange 로 분석도 가능할까요? ㅠㅠ 도와주세요.
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답변 2
  • 답변

    심용호님의 답변

    2008-12-31
    • 0
    안녕하세요. 기계 옆에서 같이 관찰하지 못하니 구체적인것은 말씀드리기 힘들고요. 단지 압력이 불안정하고 retention time이 다르다..온도의 영향을 받는다. 요즘같이 추운날과 더운 여름날의 데이터를 비교할때 retention time이 다를수 있습니다. 그게 아니라면 연속으로 두번 분석을 했을때 차이가 거의 없습니다. 그러나 10분 전에 분석하고 지금 했는데 다르게 나온다... 요거는 온도의 영향이라고 보기 어렵습니다. 먼저 압력이 어떻게 다릅니까? 인젝션하기전과 한 후에 낮아집니까 높아집니까? 2.필터컬럼을 바꿔보세요. 막혔을지도 모르니까. 3.아무것도 인젝션하지말고 그냥 스타트 2번해서 압력변화와 용매 피크를 보세요. 차이가 있는지. 4.이동상을 취해서 인젝션해보세요. 압력변화와 피크에 변화가 있는지. 5.3,4를 연속적으로 두번씩 실행해서 피크들과 압력을 비교해 보세요. 변화가 없어야 합니다. 6.변화가 있다면 기계에서 리크가 없는지 막혔는지를 보세요. 7.변화가 없다면 시료를 필터해서 (이물질 제거하고) 많이 묽혀서 인젝션 해보고, 10배 100배 농축용액을 인젝션 해보세요. 여기서도 압력과 피크의 변화가 없어야 합니다. 변화가 어디서 부터 있는지를 알아보고 그 내용을 전문가에에 의뢰하시면 됩니다. 많은 경우, 여러명이 사용하는 기계에서는 이전에 사용한 사람의 찌꺼기가 남아 있어서 이동상을 바꿀 경우 염들이 결정화 되어 컬럼을 막는 등, 다양한 요소가 있으므로 이런것도 점검해야 합니다. 또 자신이 테스트 한 내용들을 자세히 설명해서 글을 올리세요. 구체적인 답변을 찾을수가 있을것입니다. >제가 지금 사용하는 컬럼은 Xterra이구요. 시마즈 semi-prep LC를 사용하고 있습니다. >이동상은 Sodium heptanesulfonate, sodium dihydrogenphosphate를 넣은 물과 아세토나이트릴을 사용하고 pH는 2.1로 맞춥니다. > >분석하고자 하는 물질은 S-allyl L cysteine 이구요. 이외에 비슷한 구조의 물질들을 분석합니다. > >그런데 분석 도중 내내 retention time이 일정하지 않고 압력 또한 불안정해서 >전문가한테 여쭤보니 이 이동상은 ion pair 방법으로 컬럼의 온도 유지가 중요하다고 하더군요. > >근데 제가 사용하고 있는 LC는 컬럼 오븐이 없어요 ㅠ > >-해결할수 있는 방법이 무엇이 있을까요? > >-아니면 capillary chromatography, ion exchange 로 분석도 가능할까요? > > >ㅠㅠ 도와주세요. > >
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    안녕하세요. 기계 옆에서 같이 관찰하지 못하니 구체적인것은 말씀드리기 힘들고요. 단지 압력이 불안정하고 retention time이 다르다..온도의 영향을 받는다. 요즘같이 추운날과 더운 여름날의 데이터를 비교할때 retention time이 다를수 있습니다. 그게 아니라면 연속으로 두번 분석을 했을때 차이가 거의 없습니다. 그러나 10분 전에 분석하고 지금 했는데 다르게 나온다... 요거는 온도의 영향이라고 보기 어렵습니다. 먼저 압력이 어떻게 다릅니까? 인젝션하기전과 한 후에 낮아집니까 높아집니까? 2.필터컬럼을 바꿔보세요. 막혔을지도 모르니까. 3.아무것도 인젝션하지말고 그냥 스타트 2번해서 압력변화와 용매 피크를 보세요. 차이가 있는지. 4.이동상을 취해서 인젝션해보세요. 압력변화와 피크에 변화가 있는지. 5.3,4를 연속적으로 두번씩 실행해서 피크들과 압력을 비교해 보세요. 변화가 없어야 합니다. 6.변화가 있다면 기계에서 리크가 없는지 막혔는지를 보세요. 7.변화가 없다면 시료를 필터해서 (이물질 제거하고) 많이 묽혀서 인젝션 해보고, 10배 100배 농축용액을 인젝션 해보세요. 여기서도 압력과 피크의 변화가 없어야 합니다. 변화가 어디서 부터 있는지를 알아보고 그 내용을 전문가에에 의뢰하시면 됩니다. 많은 경우, 여러명이 사용하는 기계에서는 이전에 사용한 사람의 찌꺼기가 남아 있어서 이동상을 바꿀 경우 염들이 결정화 되어 컬럼을 막는 등, 다양한 요소가 있으므로 이런것도 점검해야 합니다. 또 자신이 테스트 한 내용들을 자세히 설명해서 글을 올리세요. 구체적인 답변을 찾을수가 있을것입니다. >제가 지금 사용하는 컬럼은 Xterra이구요. 시마즈 semi-prep LC를 사용하고 있습니다. >이동상은 Sodium heptanesulfonate, sodium dihydrogenphosphate를 넣은 물과 아세토나이트릴을 사용하고 pH는 2.1로 맞춥니다. > >분석하고자 하는 물질은 S-allyl L cysteine 이구요. 이외에 비슷한 구조의 물질들을 분석합니다. > >그런데 분석 도중 내내 retention time이 일정하지 않고 압력 또한 불안정해서 >전문가한테 여쭤보니 이 이동상은 ion pair 방법으로 컬럼의 온도 유지가 중요하다고 하더군요. > >근데 제가 사용하고 있는 LC는 컬럼 오븐이 없어요 ㅠ > >-해결할수 있는 방법이 무엇이 있을까요? > >-아니면 capillary chromatography, ion exchange 로 분석도 가능할까요? > > >ㅠㅠ 도와주세요. > >
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  • 답변

    조윤환님의 답변

    2009-01-08
    • 0
    구체적인 상황에 대한 파악이 어렵군요. 앞서 답변하신 분이 매우 자세하게 안내해주셨군요. 한가지 덧붙여 제언드리자면, RT가 자꾸 바뀌는 것은 아무래도 압력에 의한 영향으로 보입니다. 앞서 답변하신 분이 지적하셨듯이 실내 온도가 급격하게 변하는 것이 아니므로 분석간 RT변화는 크지 않을 것입니다. 한낮과 밤중에 실험한 결과의 RT값이 다르다면 이해가 되는 부분이지만요. 제 생각엔 압력이 불안정하다고 하신 것은 분석이 진행되는 동안 펌프에 나타나는 압력이 크게 요동치는 것을 표현하신게 아닌가 싶습니다. 이런 경우 대부분은 펌프에서 컬럼으로 공급되는 라인 중간에 위치하는 밸브에 문제가 있을 땝니다. 보통 작은 볼이 들어 있어 펌프에서 컬럼으로만 이동상이 흐르고 반대로는 흐르지 못하도록 되어 있습니다. 하지만 사용하면서 염이나 불용성 이물이 끼게 되면 이 볼이 제대로 작동하지 않아서 역류가 발생하고, 이로 인해 압력이 요동치게 됩니다. 가장 좋은 해결책은 일단 이 밸브를 분해해서 세척한 후 사용하는 것이고, 그래도 해결되지 않으면 새것으로 교환해야 합니다. 스스로 하실 수 있다면 좋겠으나, 그렇지 못하다면 A/S 엔지니어에게 자세한 상황 설명을 하시고 도움을 받으시는 편이 좋습니다. 부품을 교환해야 하는 경우라면 어차피 도움을 받아야 하기 때문입니다.
    답변수정
    구체적인 상황에 대한 파악이 어렵군요. 앞서 답변하신 분이 매우 자세하게 안내해주셨군요. 한가지 덧붙여 제언드리자면, RT가 자꾸 바뀌는 것은 아무래도 압력에 의한 영향으로 보입니다. 앞서 답변하신 분이 지적하셨듯이 실내 온도가 급격하게 변하는 것이 아니므로 분석간 RT변화는 크지 않을 것입니다. 한낮과 밤중에 실험한 결과의 RT값이 다르다면 이해가 되는 부분이지만요. 제 생각엔 압력이 불안정하다고 하신 것은 분석이 진행되는 동안 펌프에 나타나는 압력이 크게 요동치는 것을 표현하신게 아닌가 싶습니다. 이런 경우 대부분은 펌프에서 컬럼으로 공급되는 라인 중간에 위치하는 밸브에 문제가 있을 땝니다. 보통 작은 볼이 들어 있어 펌프에서 컬럼으로만 이동상이 흐르고 반대로는 흐르지 못하도록 되어 있습니다. 하지만 사용하면서 염이나 불용성 이물이 끼게 되면 이 볼이 제대로 작동하지 않아서 역류가 발생하고, 이로 인해 압력이 요동치게 됩니다. 가장 좋은 해결책은 일단 이 밸브를 분해해서 세척한 후 사용하는 것이고, 그래도 해결되지 않으면 새것으로 교환해야 합니다. 스스로 하실 수 있다면 좋겠으나, 그렇지 못하다면 A/S 엔지니어에게 자세한 상황 설명을 하시고 도움을 받으시는 편이 좋습니다. 부품을 교환해야 하는 경우라면 어차피 도움을 받아야 하기 때문입니다.
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