2009-01-16
org.kosen.entty.User@cd5e144
이은종(enfy)
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제대혈, 지방, 태반, 골수 유래 mesenchymal stem cell에서 분화정도의 차이를 확인하는 실험을 하고 있습니다. 그 중에 지방세포로의 분화를 실험하고 있는데 지방세포로의 확실한 분화를 보고자 예비실험 중에 궁금한 점이 있어 질물을 올립니다.
중간엽 줄기세포를 지방세포로 분화하는 protocol을 조금씩 차이가 있는데 제가 하는 방법은
1. 각 조직에서 MSC를 분리하여 passage1번부터 2까지 계대배양을 한다.
2. Passage 3번부터 Expansion media에서 배양한다.
(DMEM/F12, 10% FBS, 5ng/ml EGF, 0.25ng/ml bFGF, 0.25ng/ml TGF-B1)
3. flask에 confluent하게 자라면 differnetiation media로 3일동안 배양한다.
(DMEM/F12, 3% FBS, 33uM Biotin, 17uM pantothenate, 1uM Insulin,
1uM Dexametasone, 250uM IBMX, 100uM indomethasine)
4. 3일 후 adipocyte media로 교환 후 lipid droplet이 커질때까지 배양한다.
(DMEM/F12, 3% FBS, 33uM Biotin, 17uM pantothenate, 100nM insulin, 1uM Dexametasone)
질문 사항은
1. 3T3같은 preadipocyte에서는 분화시 FCS나 BCS를 사용하던데, 좀 더 빠른 분화를 위해서 다른 프로토콜이나 tip이 있을까요?
2. 또한 아직 정량분석을 해보지 않았는데 지방세포로 분화시켰을때 보통 몇 퍼센트의 분화율을 갖는지 알 수 있을까요?
해보신 분들의 조언이나 참고할만한 논문 추천 부탁드립니다.
- mesenchyaml stem cell
- adipogenic
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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