2009-02-04
org.kosen.entty.User@60b4ab3e
김지애(greenell110)
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제가 MACS를 사용해서 cell을 purify하는데
purify히거 FACS로 분석을 해보면 purity가 70%정도밖에 나오지 않습니다.
여러 번을 해 봐도 계속 그런데..
아무래도 제가 실험을 하면서 놓치는 부분이 있는 것 같습니다.
MACS사용시 주의할 점이라던가
purity를 높일 수 있는 방법엔 어떤 것들이 있는지 알고 싶습니다.
- MACS
- purity
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
안길홍님의 답변
2009-02-05- 0
첨부 자료 -
답변
민보경님의 답변
2009-02-10- 0
1. MACS를 분리할 땐 제일 중요한 것이 세포의 상태입니다. 일반적으로 혈액에서 분리한 PBMC의 경우 Ficoll 분리상태가 깨끗해야하는데 혈액이 오래되거나 분리가 잘 안되서 Granulocytes등이 많이 유입되면 이 세포들이 aggregates을 만들고 세포의 순도를 떨어뜨립니다. 2. 분리하고자 하는 항체가 중요합니다. 항체에 따라서 분리할때 효율과 순도가 달라지기 때문에 순도가 중요한 경우라면 2회 분리를 하는 것도 도움이 됩니다. 특히 세포수가 적은 경우 rare population 일 경우에는 2번 이상 분리하여야 순도가 잘 나옵니다. 3. 분리시 세포수를 조금 낮추어 봅니다. miniMACS의 경우 최대 2 x 10^8까지 loading할 수 있지만 실제로 10^8 정도가 1회 loading 양으로 적합한 것 같습니다. 좀더 자세한 정보를 올려주시면 답변에 도움이 될 듯 합니다. 감사합니다. >제가 MACS를 사용해서 cell을 purify하는데 >purify히거 FACS로 분석을 해보면 purity가 70%정도밖에 나오지 않습니다. >여러 번을 해 봐도 계속 그런데.. >아무래도 제가 실험을 하면서 놓치는 부분이 있는 것 같습니다. >MACS사용시 주의할 점이라던가 >purity를 높일 수 있는 방법엔 어떤 것들이 있는지 알고 싶습니다. -
답변
이상후님의 답변
2010-01-30- 0
>제가 MACS를 사용해서 cell을 purify하는데 >purify히거 FACS로 분석을 해보면 purity가 70%정도밖에 나오지 않습니다. >여러 번을 해 봐도 계속 그런데.. >아무래도 제가 실험을 하면서 놓치는 부분이 있는 것 같습니다. >MACS사용시 주의할 점이라던가 >purity를 높일 수 있는 방법엔 어떤 것들이 있는지 알고 싶습니다. 사용하기 전에 버퍼의 degasing 과정을 거쳐야 합니다 (약 한시간 정도). 오토맥스의 경우에는 이런 전과정이 필요없고, 단지 positive 나 negative 방법만 있는 맥스와 달리 플로우 속도나 컬럼통과 회수 등에 따라 수율을 높이는 방법, 또는 purity 를 높이는 방법, 사용하는 항체의 발현정도가 낮은 경우 등 다양한 프로토콜을 사용할 수 있고 빠른시간내에 실험이 끝나는 장점이 있습니다. 반면, 약 2 주에 한번씩 컬럼을 무조건 교체해야 하므로 별로 맥스소팅을 많이 하지 않는 실험실에는 권장하지 않으며, 기기 자체가 클린벤취 안에 들어갈 수 없으므로 완벽한 멸균환경이 만들어지지 않습니다. (또 기기 값도 좀 비쌉니다...) 편의성 면에서는 매우 만족하고 있습니다. 다른 회사로는 Stem Cell 이란 곳에서 컬럼을 사용하지 않는 완전자동 분리기기를 판매합니다