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지식나눔

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kinase activity 측정 방법이요,,,

2009-02-09 org.kosen.entty.User@1d04b18 황혜정(dianastar)
  • 3
AMPK phosphorylation은 p-AMPK로 확인하면 되는데요 일반 적으로 AMPK activity는 어떻게 측정 해야 하는지요? 논문을 찾아보니까 SAMS peptide phosphorylation assay로 측정 한다고 하던데.. 제가 잘 몰라서요..혹시 어떤 방법 인지 어떻게 하는 것인지 알려주시면 감사하겠습니다. 혹 이 방법외에 다른 방법이 있다면 어떤 것이 있는지 알려주세요
  • AMPK kinase assay
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답변 3
  • 답변

    이상후님의 답변

    2009-02-09
    • 2
    >AMPK phosphorylation은 p-AMPK로 확인하면 되는데요 > >일반 적으로 AMPK activity는 어떻게 측정 해야 하는지요? > >논문을 찾아보니까 SAMS peptide phosphorylation assay로 측정 한다고 하던데.. > >제가 잘 몰라서요..혹시 어떤 방법 인지 어떻게 하는 것인지 알려주시면 감사하겠습니다. > >혹 이 방법외에 다른 방법이 있다면 어떤 것이 있는지 알려주세요 Human muscle에서 AMPK activity를 측정하기 위해서는 anti-a1-AMPK 와 anti-a2-AMPK antibody를 이용하여 muscle lysate protein의 약 수백 마이크로그램정도의 immunoprecipitates에서 측정합니다. AMPK activity를 측정하기 위해서는 기질로서 SAMS-peptide (HMRSAMSGLHLVKRR; 약 200 ？mol/liter)를 사용하여 p81 filter paper assay로 사용하게 됩니다. Biopsies를 homogenization시킨후에, overnight immunoprecipitation후에 the immune complexes들을 washing시킴니다. 이후에 NaCl을 포함하고 있는 Hepes buffer (pH 7.0)로 final washing시킴니다. Reference (1. HAYASHI, T., HIRSHMAN, M. F., FUJII, N., HABINOWSKI, S. A., WITTERS, L. A. & GOODYEAR, L. J. (2000). Metabolic stress and altered glucose transport. Diabetes 49, 527?531.; Jørgen F. P. Wojtaszewski, Pernille Nielsen, Bo F. Hansen, Erik A. Richter and Bente Kiens. Journal of Physiology (2000), Isoform-specific and exercise intensity-dependent activation of 5?-AMP-activated protein kinase in human skeletal muscle. 528(1), 221?226) 참고바랍니다.
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    >AMPK phosphorylation은 p-AMPK로 확인하면 되는데요 > >일반 적으로 AMPK activity는 어떻게 측정 해야 하는지요? > >논문을 찾아보니까 SAMS peptide phosphorylation assay로 측정 한다고 하던데.. > >제가 잘 몰라서요..혹시 어떤 방법 인지 어떻게 하는 것인지 알려주시면 감사하겠습니다. > >혹 이 방법외에 다른 방법이 있다면 어떤 것이 있는지 알려주세요 Human muscle에서 AMPK activity를 측정하기 위해서는 anti-a1-AMPK 와 anti-a2-AMPK antibody를 이용하여 muscle lysate protein의 약 수백 마이크로그램정도의 immunoprecipitates에서 측정합니다. AMPK activity를 측정하기 위해서는 기질로서 SAMS-peptide (HMRSAMSGLHLVKRR; 약 200 ？mol/liter)를 사용하여 p81 filter paper assay로 사용하게 됩니다. Biopsies를 homogenization시킨후에, overnight immunoprecipitation후에 the immune complexes들을 washing시킴니다. 이후에 NaCl을 포함하고 있는 Hepes buffer (pH 7.0)로 final washing시킴니다. Reference (1. HAYASHI, T., HIRSHMAN, M. F., FUJII, N., HABINOWSKI, S. A., WITTERS, L. A. & GOODYEAR, L. J. (2000). Metabolic stress and altered glucose transport. Diabetes 49, 527?531.; Jørgen F. P. Wojtaszewski, Pernille Nielsen, Bo F. Hansen, Erik A. Richter and Bente Kiens. Journal of Physiology (2000), Isoform-specific and exercise intensity-dependent activation of 5?-AMP-activated protein kinase in human skeletal muscle. 528(1), 221?226) 참고바랍니다.
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  • 답변

    신재욱님의 답변

    2009-02-10
    • 2
    아래의 web site에 자세한 실험법과 Reagent 제조법이 나옵니다. 참고하세요 http://www.hopkinsmedicine.org/ibbs/research/CMOR/CMOR_Protocols/B5a.pdf
    답변수정
    아래의 web site에 자세한 실험법과 Reagent 제조법이 나옵니다. 참고하세요 http://www.hopkinsmedicine.org/ibbs/research/CMOR/CMOR_Protocols/B5a.pdf
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  • 답변

    안길홍님의 답변

    2010-02-01
    • 0

    첨부파일

    >AMPK phosphorylation은 p-AMPK로 확인하면 되는데요 > >일반 적으로 AMPK activity는 어떻게 측정 해야 하는지요? > >논문을 찾아보니까 SAMS peptide phosphorylation assay로 측정 한다고 하던데.. > >제가 잘 몰라서요..혹시 어떤 방법 인지 어떻게 하는 것인지 알려주시면 감사하겠습니다. > >혹 이 방법외에 다른 방법이 있다면 어떤 것이 있는지 알려주세요 첨부자료
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    >AMPK phosphorylation은 p-AMPK로 확인하면 되는데요 > >일반 적으로 AMPK activity는 어떻게 측정 해야 하는지요? > >논문을 찾아보니까 SAMS peptide phosphorylation assay로 측정 한다고 하던데.. > >제가 잘 몰라서요..혹시 어떤 방법 인지 어떻게 하는 것인지 알려주시면 감사하겠습니다. > >혹 이 방법외에 다른 방법이 있다면 어떤 것이 있는지 알려주세요 첨부자료
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