2009-02-11
org.kosen.entty.User@b8b9a6f
박선영(pgene)
- 2
안녕하세요.
제가 sds-page를 후 coomassie염색을 통해 단백질이 있는지 확인해 보려고 합니다.
이렇게 하는 이유는 BCA 단백질 정량을 통해서 단백질양을 확인하였는데,
양이 너무 소량이어서, 그리고 샘플량이 많지 않아서
단백질양과 여부를 확인 후 확인된 샘플로만 HPLC로 분석을 하려고 합니다.
전기영동 진행시 loading dye(sample buffer):sample:D.W 양을
어떻게 해야하는지 잘 몰라서요.
우리 실험실에서 사용하는 loading dye는 5X를 사용하고 있습니다.
보통 BCA 단백질 정량 결과 단백질양은
적은 것은 14.593~47.845㎍/㎖ 값을 나타내고,
90.827㎍/㎖ &
많은 것은 119.194㎍/㎖, 153.264㎍/㎖ 값을 나타내고 있습니다.
보통 최종 30㎕를 만들어서 20㎕를 loading하구요.
아시는 분 계시다면 어떻게 계산을 해야하는 것인지,
그리고 위의 샘플량을 예로 해서 샘플과, 샘플버퍼, 정제수 량을
어느 정도로 해야하는지...
답변 부탁드립니다.
감사합니다.
- protein
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
신재욱님의 답변
2009-02-11- 0
특별한 샘플이 아니라면 굳이 샘플이나 샘플버퍼에 D.W를 넣지 않아도 됩니다. 5X loading buffer면 loading buffer(sample buffer) 1 : sample 4의 비율로 mix하시면 됩니다. 예로 sample 90ug/mL, 120ug, 150ug/mL을 위의 식에 적용시킨다면 sample buffer 6uL와 sample 24uL를 mix하여 30uL중 20uL loading하면 각각 loading 단백질량은 1.44ug, 1.92ug, 2.4ug이 됩니다. -
답변
DELETED님의 답변
2010-01-08- 0
>안녕하세요. > >제가 sds-page를 후 coomassie염색을 통해 단백질이 있는지 확인해 보려고 합니다. >이렇게 하는 이유는 BCA 단백질 정량을 통해서 단백질양을 확인하였는데, >양이 너무 소량이어서, 그리고 샘플량이 많지 않아서 >단백질양과 여부를 확인 후 확인된 샘플로만 HPLC로 분석을 하려고 합니다. > >전기영동 진행시 loading dye(sample buffer):sample:D.W 양을 >어떻게 해야하는지 잘 몰라서요. >우리 실험실에서 사용하는 loading dye는 5X를 사용하고 있습니다. >보통 BCA 단백질 정량 결과 단백질양은 >적은 것은 14.593~47.845㎍/㎖ 값을 나타내고, >90.827㎍/㎖ & >많은 것은 119.194㎍/㎖, 153.264㎍/㎖ 값을 나타내고 있습니다. > >보통 최종 30㎕를 만들어서 20㎕를 loading하구요. > >아시는 분 계시다면 어떻게 계산을 해야하는 것인지, >그리고 위의 샘플량을 예로 해서 샘플과, 샘플버퍼, 정제수 량을 >어느 정도로 해야하는지... >답변 부탁드립니다. > >감사합니다. > > Re: sample과 Dw의 비율을 궂이 중요시 할 필요없습니다. 적정농도로 sample을 dilution하시고, 5x sample buffer를 1/5 첨가하시어 denature후 loading하시면 될것 같네요..