2009-03-02
org.kosen.entty.User@19f16eda
최희진(gloryheeji)
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EMSA 실험에 관한 질문을 드리고자 합니다.
biotin-labeled probe와 nuclear extract를 이용하여 emsa를 하는데 처음 실험에서는 protein 농도를 정하기 위해 2~10 microgram/microliter 별로 농도를 달리하여 emsa를 수행한 결과 4~6 conc.가 적절하고 free probe도 보였습니다. 그 뒤 이 농도를 가지고 실험을 수행한 결과
1~2번은 더 free probe도 보이고 protein-DNA complex로 보이는 band shift도 관찰되었습니다. 그런데 어느 순간부터 free probe들이 사라지고 보이지 않습니다.
여전히 protein-DNA complex로 보이는 band shift는 같은 위치? 에서 관찰되어 지고 있습니다. free probe이 꼭 있어야 하는 건 아니지만 저처럼 처음엔 보이다가 사라지면 이를 어떻게 이해해야 할까요? protein excess로 여겨 농도를 낮춰서도 실험해 보았지만 여전히 보이지 않습니다. competition assay는 성공적으로 free probe만 남고 shift된 band들은 모두 사라짐을 보였습니다.
답변 부탁드립니다.
- EMSA
- free probe
- protein excess
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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