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지식나눔

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Antibody phage display

2009-03-02 org.kosen.entty.User@3604d371 정복기(skulljung)
  • 1
Phage display를 처음 setting 하는 중이라는 아직 concept자체도 이해를 하지 못했습니다. 그 중에서도 이해가 잘 않되는 부분은 아래와 같습니다. 저는 amplified DNA를 pCANTAB5E라는 M13 phagemid vector에 clon한 뒤, 이를 XL1-Blue MRF cells에 transformation하려고 합니다. 여기까지는 기존에 제가 해왔던 cloning과 별차이가 없어서 문제가 없는데, 다음 과정부터 이해가 잘 안되어서 질문을 드립니다. 참고로 하는 논문에 보면, Library size를 determine하였다고 했는데 library size가 무엇인가요? 그리고 어리석은 질문이겠지만, M13 phage라는 것을 XL1-Blue MRF cells (E. coli)에 감염을 시키는 것인가요? 그리고 감염을 시키는 것이라면 어떻게 감염을 시키나요? 제가 아직 잘 몰라서요, 상세한 설명 부탁드리고요, 혹시 제가 참고할 만한 쉬운 문헌이나 자료있으면 같이 올려주셨으면 합니다. 그리고 여러 고수님들의 조언 부탁드립니다. 감사합니다.
  • Antibody phage display
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답변 1
  • 답변

    장성재님의 답변

    2009-03-02
    • 0

    첨부파일

    간단하게 개념을 설명드리면, Phage display란 세균에 감염되는 박테리오파아지의 외피단백질에 다양한 서열을 가진 특정 펩타이드나 단백질을 결합시켜 파아지의 비리온의 외부로 노출 시킨 후 이를 원하는 목적 단백질에 반복적으로 결합시켜 이 목적 단백질에 특이적으로 결합하는 펩타이드를 가진 phage를 screening함으로써 파아지에 삽입된 펩타이드나 단백질의 서열을 확인하는 것을 말한다. 이렇게 확인 및 동정된 펩타이드는 항체에 비해 특정한 목적 단백질에 대해 더 높은 친화성 (affinity)와 특이성 (specificity)을 가지고 있으며, 적절한 phamacokinetics, 대량 생산성, 낮은 독성, 항원성 억제, 낮은 생산 단가 등으로 인해 최근 항체 치료제를 대체하여 다양한 분야에서 활용되고 있습니다. 위의 phage를 screening하기 위해서는 먼저 phage에 다양한 유전자 (펩티드를 코드하는)를 삽입시킨 library를 만들어야 하며 (cDNA library와 같은 개념), 따라서 님께서는 a,plified DNA를 M13 phagemid vector에 클로닝 후 E.coli에 transfomation하셨군요. 혼자서 셉업하시는 것도 중요하지만, 전문가를 찾으셔서 차근차근 배우시는 것이 좋을 듯 싶네요. 일단 phage-display관련 review paper를 첨부하니 참고하시길 바랍니다. 그런 후에 관련 실험저널을 참고하셔서 실험을 진행해 나가시길 권합니다. >Phage display를 처음 setting 하는 중이라는 아직 concept자체도 이해를 하지 못했습니다. 그 중에서도 이해가 잘 않되는 부분은 아래와 같습니다. > >저는 amplified DNA를 pCANTAB5E라는 M13 phagemid vector에 clon한 뒤, 이를 XL1-Blue MRF cells에 transformation하려고 합니다. 여기까지는 기존에 제가 해왔던 cloning과 별차이가 없어서 문제가 없는데, 다음 과정부터 이해가 잘 안되어서 질문을 드립니다. > >참고로 하는 논문에 보면, Library size를 determine하였다고 했는데 library size가 무엇인가요? > >그리고 어리석은 질문이겠지만, M13 phage라는 것을 XL1-Blue MRF cells (E. coli)에 감염을 시키는 것인가요? 그리고 감염을 시키는 것이라면 어떻게 감염을 시키나요? > >제가 아직 잘 몰라서요, 상세한 설명 부탁드리고요, 혹시 제가 참고할 만한 쉬운 문헌이나 자료있으면 같이 올려주셨으면 합니다. > >그리고 여러 고수님들의 조언 부탁드립니다. 감사합니다.
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    간단하게 개념을 설명드리면, Phage display란 세균에 감염되는 박테리오파아지의 외피단백질에 다양한 서열을 가진 특정 펩타이드나 단백질을 결합시켜 파아지의 비리온의 외부로 노출 시킨 후 이를 원하는 목적 단백질에 반복적으로 결합시켜 이 목적 단백질에 특이적으로 결합하는 펩타이드를 가진 phage를 screening함으로써 파아지에 삽입된 펩타이드나 단백질의 서열을 확인하는 것을 말한다. 이렇게 확인 및 동정된 펩타이드는 항체에 비해 특정한 목적 단백질에 대해 더 높은 친화성 (affinity)와 특이성 (specificity)을 가지고 있으며, 적절한 phamacokinetics, 대량 생산성, 낮은 독성, 항원성 억제, 낮은 생산 단가 등으로 인해 최근 항체 치료제를 대체하여 다양한 분야에서 활용되고 있습니다. 위의 phage를 screening하기 위해서는 먼저 phage에 다양한 유전자 (펩티드를 코드하는)를 삽입시킨 library를 만들어야 하며 (cDNA library와 같은 개념), 따라서 님께서는 a,plified DNA를 M13 phagemid vector에 클로닝 후 E.coli에 transfomation하셨군요. 혼자서 셉업하시는 것도 중요하지만, 전문가를 찾으셔서 차근차근 배우시는 것이 좋을 듯 싶네요. 일단 phage-display관련 review paper를 첨부하니 참고하시길 바랍니다. 그런 후에 관련 실험저널을 참고하셔서 실험을 진행해 나가시길 권합니다. >Phage display를 처음 setting 하는 중이라는 아직 concept자체도 이해를 하지 못했습니다. 그 중에서도 이해가 잘 않되는 부분은 아래와 같습니다. > >저는 amplified DNA를 pCANTAB5E라는 M13 phagemid vector에 clon한 뒤, 이를 XL1-Blue MRF cells에 transformation하려고 합니다. 여기까지는 기존에 제가 해왔던 cloning과 별차이가 없어서 문제가 없는데, 다음 과정부터 이해가 잘 안되어서 질문을 드립니다. > >참고로 하는 논문에 보면, Library size를 determine하였다고 했는데 library size가 무엇인가요? > >그리고 어리석은 질문이겠지만, M13 phage라는 것을 XL1-Blue MRF cells (E. coli)에 감염을 시키는 것인가요? 그리고 감염을 시키는 것이라면 어떻게 감염을 시키나요? > >제가 아직 잘 몰라서요, 상세한 설명 부탁드리고요, 혹시 제가 참고할 만한 쉬운 문헌이나 자료있으면 같이 올려주셨으면 합니다. > >그리고 여러 고수님들의 조언 부탁드립니다. 감사합니다.
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