2009-03-16
org.kosen.entty.User@581348c1
박재성(chrisrub)
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Sephadex LH-20 오픈컬럼을 가지고 목적물질을 분리하고자 합니다.
예를 들어 1g의 sephadex LH-20을 에탄올에 팽윤시킨후 샘플을 컬럼에
로딩하여 분리하고자 할 때 컬럼에 로딩하게 되는 샘플양은 몇mL정도가
좋은지 알고 싶습니다.
Sephadex LH-20 메뉴얼에는 샘플양은 bed volume의 2%정도가 적절하다고 나와있는데
실제 실험시에는 어떻게 사용되고 있는지 답변 부탁드리겠습니다.
- sephadex
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답변 3
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답변
이상후님의 답변
2009-03-16- 2
>Sephadex LH-20 오픈컬럼을 가지고 목적물질을 분리하고자 합니다. >예를 들어 1g의 sephadex LH-20을 에탄올에 팽윤시킨후 샘플을 컬럼에 >로딩하여 분리하고자 할 때 컬럼에 로딩하게 되는 샘플양은 몇mL정도가 >좋은지 알고 싶습니다. >Sephadex LH-20 메뉴얼에는 샘플양은 bed volume의 2%정도가 적절하다고 나와있는데 >실제 실험시에는 어떻게 사용되고 있는지 답변 부탁드리겠습니다. Guideline에서 처럼, 샘플 로딩양은 bed volumn의 2%로 권장하고 있습니다. 하지만 레진의 충진상태가 매우 균일하고 ladder가 전혀 없는 상태로 충진했을 경우에는 2%로 로딩해도 무관하지만 실험자가 랩에서 스웰링 스켜서 충진할 경우 보장할 수 있을지는 의문입니다. 결국 그런 상태에서 2%로 로딩할 경우 separation 과정에서 diffusion이 일어나서 결국 resolution이 떨어질 수 있으므로 권장 볼륨보다 1~1.5%로 낮춰서 로딩해 보세요. Scale-up과정이 아니라면 샘플 로딩량이 적을수록 resolution은 더 좋아지게 됩니다. -
답변
신재욱님의 답변
2009-03-16- 2
Sephadex LH-20은 sephadex G-20처럼 gel filtration media입니다. 천연물의 정제 등과 같이 유기용매로 정제할 수 있게끔 특이화된 media입니다. 일반적으로 gel filtration column은 column bed volume의 2%미만입니다. 이것을 일반적인 사항이고 물질의 종류에 따라 로딩 볼륨을 더 낮추어야 할 때도 있습니다. 그래야 resolution이 좋아집니다. 또한 column의 폭은 좁고 높이는 높을수록 더 잘 분리가 됩니다. -
답변
안길홍님의 답변
2010-01-25- 0
첨부파일
>Sephadex LH-20 오픈컬럼을 가지고 목적물질을 분리하고자 합니다. >예를 들어 1g의 sephadex LH-20을 에탄올에 팽윤시킨후 샘플을 컬럼에 >로딩하여 분리하고자 할 때 컬럼에 로딩하게 되는 샘플양은 몇mL정도가 >좋은지 알고 싶습니다. >Sephadex LH-20 메뉴얼에는 샘플양은 bed volume의 2%정도가 적절하다고 나와있는데 >실제 실험시에는 어떻게 사용되고 있는지 답변 부탁드리겠습니다. 참고자료