2009-04-03
org.kosen.entty.User@25f49238
최미희(rainbow14)
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JM109에 plasmid를 transformation하였고요
transformation된 colony로 plasmid prep하려고 합니다.
이과정에서 저희가 원하는 plasmid는 항생제는 50mg/ml로 제조하여 냉동보관한 Ampicillin을 사용하여 50ug/mㅣ로 하였습니다.
그런데 특이하게 액체배지에서는 자라지 않는데 고체배지에서는 자라는 현상이 나타나고 있습니다.
제조해 놓은 Ampicillin이 잘못 조제되어있는것인지..
Ampicillin의 농도를 낮추어서 test 해보았는데요. 10ug/ml과 20ug/ml에서는 자랍니다.50ug/ml에서는 가느다란 실처럼 자라는것 같기도 한데 배양액의 색이 뿌연해 지지는 않습니다.
이런경우 Ampicillin의 농도 문제일까요?
또한 Ampicillin의 농도 차이가 어떤 영향이 있는지 알고 싶습니다.
참고고 Ampicillin은 sigma에서 나온 salt붙어있는 제품을 사용하였습니다.
anhydrous를 사용할때와 어떤 차이점이 있는지 궁금합니다.
고수님들 답변 부탁드립니다.^^
- Ampicillin
- E. coli
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답변 3
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신재욱님의 답변
2009-04-03- 0
일반적으로 low copy plasmid의 경우는 50μg/mL, high copy plasmid의 경우에는 100μg/mL을 많이 사용합니다. 일단 Ampicillin의 농도를 100μg/mL로 올려보시기 바랍니다. Ampicillin anhydrous와 Ampicillin salt form은 물에 잘 녹도록 salt를 붙여 놓은 것입니다. Ampicillin을 물에 녹일때 anhydrous보다 salt form이 더 잘 녹으며 또한 Ampicillin이 같은량이면 salt form이 anhydrous보다 무게가 조금 더 나갑니다. 비록 무시할정도지만요... Ampicillin양을 더 증가시켜보시기 바랍니다. -
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전정용님의 답변
2009-06-30- 0
특이한 경우인데요.... 여러가지가 생각이 되는데 일단.. transformation 자체가 잘 안되었을 경우가 있구요 Ampicillin 자체는 보관을 너무 잘 못하지 않는이상은 괜찮을거 같네요 액체상태에서 자라지 않는걸 보니 airation이 제대로 되지 않거나 온도가 맞지 않거나 할 수도 있을것 같네요 확인해 보시는게 좋을거 같네요 >JM109에 plasmid를 transformation하였고요 >transformation된 colony로 plasmid prep하려고 합니다. >이과정에서 저희가 원하는 plasmid는 항생제는 50mg/ml로 제조하여 냉동보관한 Ampicillin을 사용하여 50ug/mㅣ로 하였습니다. >그런데 특이하게 액체배지에서는 자라지 않는데 고체배지에서는 자라는 현상이 나타나고 있습니다. >제조해 놓은 Ampicillin이 잘못 조제되어있는것인지.. >Ampicillin의 농도를 낮추어서 test 해보았는데요. 10ug/ml과 20ug/ml에서는 자랍니다.50ug/ml에서는 가느다란 실처럼 자라는것 같기도 한데 배양액의 색이 뿌연해 지지는 않습니다. >이런경우 Ampicillin의 농도 문제일까요? >또한 Ampicillin의 농도 차이가 어떤 영향이 있는지 알고 싶습니다. >참고고 Ampicillin은 sigma에서 나온 salt붙어있는 제품을 사용하였습니다. >anhydrous를 사용할때와 어떤 차이점이 있는지 궁금합니다. >고수님들 답변 부탁드립니다.^^ -
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DELETED님의 답변
2010-01-05- 0
>JM109에 plasmid를 transformation하였고요 >transformation된 colony로 plasmid prep하려고 합니다. >이과정에서 저희가 원하는 plasmid는 항생제는 50mg/ml로 제조하여 냉동보관한 Ampicillin을 사용하여 50ug/mㅣ로 하였습니다. >그런데 특이하게 액체배지에서는 자라지 않는데 고체배지에서는 자라는 현상이 나타나고 있습니다. >제조해 놓은 Ampicillin이 잘못 조제되어있는것인지.. >Ampicillin의 농도를 낮추어서 test 해보았는데요. 10ug/ml과 20ug/ml에서는 자랍니다.50ug/ml에서는 가느다란 실처럼 자라는것 같기도 한데 배양액의 색이 뿌연해 지지는 않습니다. >이런경우 Ampicillin의 농도 문제일까요? >또한 Ampicillin의 농도 차이가 어떤 영향이 있는지 알고 싶습니다. >참고고 Ampicillin은 sigma에서 나온 salt붙어있는 제품을 사용하였습니다. >anhydrous를 사용할때와 어떤 차이점이 있는지 궁금합니다. >고수님들 답변 부탁드립니다.^^ >Re: Amp의 경우 다른 antibiotics보다 잘 깨지는 편입니다. 보통은 stringent condition으로 100ug/ml을 사용하는데, 그래도 문제라면 shelflife를 확인해 볼 필요가 있겠습니다.