2009-04-21
org.kosen.entty.User@498643b5
박재성(chrisrub)
- 4
Sephadex LH-20 column을 이용하여 물질분리를 하고 있습니다.
그러나 분획시 컬럼에 균열이 생기는 문제가 계속 발생하고 있습니다.
먼저 Sephadex LH-20(100g)을 100% 에탄올에 팽윤시킨뒤
시료(dissolved in 60% 에탄올)를 로딩한후 이동상용매 100% 에탄올을 흘려주면
시료층이 컬럼을 이동하면서 컬럼에 균열이 발생합니다.
여러 논문상에서는 Sephadex LH-20을 팽윤시키는 용매와 시료추출용매,
이동상용매가 모두 동일하게 나와있으나, 팽윤부피가 다른 이동상용매로
변화를 주어 분획한 경우도 있었습니다. 따라서
시료(dissolved in 60% 에탄올)에 포함된 약간의 물의 영향으로 컬럼균열에
영향을 미치는 것인지, 아니면 컬럼패킹시 air제거 불충분인지
도저히 감이 잡히질 않네요,,,
Sephadex LH-20 컬럼 사용시 용매사용을 꼭 한 용매만으로 해야하나요?
아니면 Sephadex LH-20을 컬럼에 충전시 에어를 제거하는 효과적인 방법이 있나요?
조언 부탁드리겠습니다!
P.S:컬럼충전시 펌프를 이용하여 가압 하잖아요?
근데 저는 컬럼 outlet부분에서 펌프를 이용하여 suction하는 형태라
이 방법도 괜찮나요?
sephadex LH-20을 사용하셔본 많은 분들의 도움 부탁드릴께요~ㅠㅠ
- Sephadex lh-20
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
이상후님의 답변
2009-04-21- 2
>Sephadex LH-20 column을 이용하여 물질분리를 하고 있습니다. > >그러나 분획시 컬럼에 균열이 생기는 문제가 계속 발생하고 있습니다. > >먼저 Sephadex LH-20(100g)을 100% 에탄올에 팽윤시킨뒤 > >시료(dissolved in 60% 에탄올)를 로딩한후 이동상용매 100% 에탄올을 흘려주면 > >시료층이 컬럼을 이동하면서 컬럼에 균열이 발생합니다. > >여러 논문상에서는 Sephadex LH-20을 팽윤시키는 용매와 시료추출용매, > >이동상용매가 모두 동일하게 나와있으나, 팽윤부피가 다른 이동상용매로 > >변화를 주어 분획한 경우도 있었습니다. 따라서 > >시료(dissolved in 60% 에탄올)에 포함된 약간의 물의 영향으로 컬럼균열에 > >영향을 미치는 것인지, 아니면 컬럼패킹시 air제거 불충분인지 > >도저히 감이 잡히질 않네요,,, > >Sephadex LH-20 컬럼 사용시 용매사용을 꼭 한 용매만으로 해야하나요? > >아니면 Sephadex LH-20을 컬럼에 충전시 에어를 제거하는 효과적인 방법이 있나요? > >조언 부탁드리겠습니다! > >P.S:컬럼충전시 펌프를 이용하여 가압 하잖아요? > 근데 저는 컬럼 outlet부분에서 펌프를 이용하여 suction하는 형태라 > 이 방법도 괜찮나요? > > sephadex LH-20을 사용하셔본 많은 분들의 도움 부탁드릴께요~ㅠㅠ Gel을 swelling시킬 때 사용하는 용매는 가급적이면 시료를 loading하는 용매를 사용하는 것이 좋습니다. 또한 충진시에 사용하는 펌프는 peristaltic pump를 사용해야 하며 일반 펌프를 사용하시면 안됩니다. 일정한 유속과 압력을 유지시켜 주지 않으면 충진된 gel들이 변형을 가져오거나 균열이 생길 수 있습니다. 제가 보기에는 펌프 사용에 문제가 있는거 같습니다. Peristaltic pump로 사용해 보시기 바랍니다. 참고적으로 에어 제거는 suction flask를 이용해서 30분에서 1시간 정도 해 주시면 됩니다.
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답변
이상후님의 답변
2009-04-23- 2
>Sephadex LH-20 column을 이용하여 물질분리를 하고 있습니다. > >그러나 분획시 컬럼에 균열이 생기는 문제가 계속 발생하고 있습니다. > >먼저 Sephadex LH-20(100g)을 100% 에탄올에 팽윤시킨뒤 > >시료(dissolved in 60% 에탄올)를 로딩한후 이동상용매 100% 에탄올을 흘려주면 > >시료층이 컬럼을 이동하면서 컬럼에 균열이 발생합니다. > >여러 논문상에서는 Sephadex LH-20을 팽윤시키는 용매와 시료추출용매, > >이동상용매가 모두 동일하게 나와있으나, 팽윤부피가 다른 이동상용매로 > >변화를 주어 분획한 경우도 있었습니다. 따라서 > >시료(dissolved in 60% 에탄올)에 포함된 약간의 물의 영향으로 컬럼균열에 > >영향을 미치는 것인지, 아니면 컬럼패킹시 air제거 불충분인지 > >도저히 감이 잡히질 않네요,,, > >Sephadex LH-20 컬럼 사용시 용매사용을 꼭 한 용매만으로 해야하나요? > >아니면 Sephadex LH-20을 컬럼에 충전시 에어를 제거하는 효과적인 방법이 있나요? > >조언 부탁드리겠습니다! > >P.S:컬럼충전시 펌프를 이용하여 가압 하잖아요? > 근데 저는 컬럼 outlet부분에서 펌프를 이용하여 suction하는 형태라 > 이 방법도 괜찮나요? > > sephadex LH-20을 사용하셔본 많은 분들의 도움 부탁드릴께요~ㅠㅠ 에어제거는 컬럼에 레진을 충진하기전에 vacuum flask에 넣고 degassing해야 됩니다... -
답변
김범수님의 답변
2010-01-13- 0
>Sephadex LH-20 column을 이용하여 물질분리를 하고 있습니다. > >그러나 분획시 컬럼에 균열이 생기는 문제가 계속 발생하고 있습니다. > >먼저 Sephadex LH-20(100g)을 100% 에탄올에 팽윤시킨뒤 > >시료(dissolved in 60% 에탄올)를 로딩한후 이동상용매 100% 에탄올을 흘려주면 > >시료층이 컬럼을 이동하면서 컬럼에 균열이 발생합니다. > >여러 논문상에서는 Sephadex LH-20을 팽윤시키는 용매와 시료추출용매, > >이동상용매가 모두 동일하게 나와있으나, 팽윤부피가 다른 이동상용매로 > >변화를 주어 분획한 경우도 있었습니다. 따라서 > >시료(dissolved in 60% 에탄올)에 포함된 약간의 물의 영향으로 컬럼균열에 > >영향을 미치는 것인지, 아니면 컬럼패킹시 air제거 불충분인지 > >도저히 감이 잡히질 않네요,,, > >Sephadex LH-20 컬럼 사용시 용매사용을 꼭 한 용매만으로 해야하나요? > >아니면 Sephadex LH-20을 컬럼에 충전시 에어를 제거하는 효과적인 방법이 있나요? > >조언 부탁드리겠습니다! > >P.S:컬럼충전시 펌프를 이용하여 가압 하잖아요? > 근데 저는 컬럼 outlet부분에서 펌프를 이용하여 suction하는 형태라 > 이 방법도 괜찮나요? > > sephadex LH-20을 사용하셔본 많은 분들의 도움 부탁드릴께요~ㅠㅠ 시료는 이동상과 동일한 용매로 준비하는 것이 좋습니다. 그리고 에어가 미세하게 있더라도 균열이 생기는 경우가 많이 있습니다. gel loading시에 가급적 시간을 두고 서서히 loading하는 것이 좋습니다. 먼저 loading한 gel이 완전히 밀착되기 전에 다시 gel을 loading하면 미세한 간극이 생기는 경우가 많습니다. 참고하시기 바랍니다. -
답변
안길홍님의 답변
2010-01-25- 0
첨부파일
>Sephadex LH-20 column을 이용하여 물질분리를 하고 있습니다. > >그러나 분획시 컬럼에 균열이 생기는 문제가 계속 발생하고 있습니다. > >먼저 Sephadex LH-20(100g)을 100% 에탄올에 팽윤시킨뒤 > >시료(dissolved in 60% 에탄올)를 로딩한후 이동상용매 100% 에탄올을 흘려주면 > >시료층이 컬럼을 이동하면서 컬럼에 균열이 발생합니다. > >여러 논문상에서는 Sephadex LH-20을 팽윤시키는 용매와 시료추출용매, > >이동상용매가 모두 동일하게 나와있으나, 팽윤부피가 다른 이동상용매로 > >변화를 주어 분획한 경우도 있었습니다. 따라서 > >시료(dissolved in 60% 에탄올)에 포함된 약간의 물의 영향으로 컬럼균열에 > >영향을 미치는 것인지, 아니면 컬럼패킹시 air제거 불충분인지 > >도저히 감이 잡히질 않네요,,, > >Sephadex LH-20 컬럼 사용시 용매사용을 꼭 한 용매만으로 해야하나요? > >아니면 Sephadex LH-20을 컬럼에 충전시 에어를 제거하는 효과적인 방법이 있나요? > >조언 부탁드리겠습니다! > >P.S:컬럼충전시 펌프를 이용하여 가압 하잖아요? > 근데 저는 컬럼 outlet부분에서 펌프를 이용하여 suction하는 형태라 > 이 방법도 괜찮나요? > > sephadex LH-20을 사용하셔본 많은 분들의 도움 부탁드릴께요~ㅠㅠ 참고자료
좋은 말씀 감사드립니다^^