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>제가 BCA 정량법을 이용하여 단백질 량을 정량하였는데...이 샘플에 대한 정확한 단백질량을 어떻게 계산하는지 도통 모르겠어서요. >우선 샘플에 대한 BCA 정량 후 OD값과 단백질량은 아래와 같습니다. > >dilution result(단백질량) values(O.D값) > 750 230.395 0.362 > 500 156.498 0.259 > 250 78.836 0.144 > >이 샘플 희석은 원래 농도가 0.44 mg/ml인데 >제가 계산 실수로 0.833mg/ml을 기준으로 750/500/250농도 기준으로 희석을 하여 >측정한 값입니다. >당연 원액은 측정하지 않았구요. > >그리고 BSA에 대한 것은 아래와 같습니다. > >농도 value >1500 1.790 >1000 1.278 > 750 0.984 > 500 0.703 > 250 0.393 > 125 0.225 > 25 0.046 > >위의 자료를 토대로 0.44 mg/ml 샘플에 해당되는 단백질량을 계산하길 원합니다. >자세한 계산법까지 답변해 주시면 너무나 감사하겠습니다. >부탁드립니다....급합니다... 질문에서의 정보가 부족하여 제가 이해한데까지만 답변을 올리자면, stock solution의 농도를 0.44 ug/ul로 하셨고, 이를 750ul 준비하여 buffer와 dilution하여 OD를 측정하였을때 그 값이 0.984로 측정이 된 것인지요? 0.44 ug/ul이 아니라 0.833ug/ul로 잘못계산하셨다고 하니... 0.833 ug/ul * 750 ul = 624.75 ug의 단백질양에 대해 OD 값이 0.984 라고 하였을 때.. 여러번의 측정을 통해 OD=a*단백질양+b 와 같은 standard curve가 얻어질 것입니다. 이 때 측정하신 OD 값 얻어지는 0.362을 standard curve에 넣고 얻어지는 단백질 양이 230.395 ug이 되는 것 같습니다. (이 때는 0.833 ug/ul로 계산..) standard curve를 어떻게 구하셨는지는 모르지만.. 그냥 750 ul volume에 대한 OD값을 적용한다면.. 0.362/0.984*750ul*0.833ug/ul = 229.837 ug 으로 구해지죠. 아마 standard curve 식을 이용한다면 위 값(230.395 ug)이 나왔을 것 같네요. 그럼 이제 0.833 ug/ul이 아닌 0.44ug/ul로 계산해보면, 0.44ug/ul * 750 ul = 330 ug 에 대해 OD가 0.984로 측정된 것입니다. 이런식으로 위 표를 생각했을 때, standard curve는 X축을 0.44/0.833배 해준 것과 같은 curve가 되겠지요. 즉 기울기가 0.833/0.44배인 standard curve를 생각하셔야 될 것입니다. 따라서 위에서 구해진 단백질 양에 0.44/0.833을 곱해주면 될 것 같네요. (사실 standard curve 식을 제대로 알면 더 정확한 계산이 될 것 같습니다만..) 일단은 standard curve가 아닌 750 ul 의 OD값으로만 계산해보겠습니다. 0.362/0.984*750ul*0.44ug/ul = 121.402 ug 입니다. (=0.44/0.833*229.837ug)