지식나눔

soluble & insoluble protein fraction 질문이요~

2D fractionation kit (GE)를 사용해서 soluble & insoluble protein을 분리해서 추출하고자 합니다. 뽑아서 2D를 하려고 합니다. kit를 이용해서 프락션을 했는데~ 이게 잘 뽑힌건지 확인할 방법을 모르겠어요~ 양이 soluble에 비해 극히 적은 것으로 봐서는 제대로 한거 같은데요~ 그리고 아무리 추출한다고 해소 soluble의 성분이 따라오는건 어쩔 수 없는 건가요?? 만약에 컨탐이 됐다면 프로테인 양에서 차이가 있는거겠죠?? 고수님들의 조언을 부탁드립니다. 질문 1. soluble과 insoluble protein을 추출했을때 잘 됐는지 확인할 수 있는 방법이 있는 것인지~~?? 질문 2. 프락션을 했을때 soluble의 성분이 어느 정도 따라오는 것이 어쩔 수 없는 것인지~
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답변 1
  • 답변

    장성재님의 답변

    총 단백질과의 비율로 확인하실 수 있을 겁니다. 그래도, 일단 실험의 재현성을 확인하시는 것이 중요하므로 반복시험이 필요합니다. 그리고, tubulin과 같은 marker 단백질을 이용해서 각 분획에서의 차이를 확인하시길 바랍니다. 두번째 질문하신 부분은 어차피 이런 방식의 분획법은 detergents와 원심 분리를 이용해서 분리하는 것이므로 100% 완벽한 분획을 기대하시기는 어렵습니다. staining이나 blotting 후의 intensity의 차이로 구분하시는 수 밖에 없을 겁니다. >2D fractionation kit (GE)를 사용해서 > >soluble & insoluble protein을 분리해서 추출하고자 합니다. > >뽑아서 2D를 하려고 합니다. > >kit를 이용해서 프락션을 했는데~ 이게 잘 뽑힌건지 확인할 방법을 모르겠어요~ > >양이 soluble에 비해 극히 적은 것으로 봐서는 제대로 한거 같은데요~ > >그리고 아무리 추출한다고 해소 soluble의 성분이 따라오는건 어쩔 수 없는 건가요?? > >만약에 컨탐이 됐다면 프로테인 양에서 차이가 있는거겠죠?? > >고수님들의 조언을 부탁드립니다. > > 질문 1. soluble과 insoluble protein을 추출했을때 잘 됐는지 확인할 수 있는 방법이 있는 것인지~~?? > >질문 2. 프락션을 했을때 soluble의 성분이 어느 정도 따라오는 것이 어쩔 수 없는 것인지~
    총 단백질과의 비율로 확인하실 수 있을 겁니다. 그래도, 일단 실험의 재현성을 확인하시는 것이 중요하므로 반복시험이 필요합니다. 그리고, tubulin과 같은 marker 단백질을 이용해서 각 분획에서의 차이를 확인하시길 바랍니다. 두번째 질문하신 부분은 어차피 이런 방식의 분획법은 detergents와 원심 분리를 이용해서 분리하는 것이므로 100% 완벽한 분획을 기대하시기는 어렵습니다. staining이나 blotting 후의 intensity의 차이로 구분하시는 수 밖에 없을 겁니다. >2D fractionation kit (GE)를 사용해서 > >soluble & insoluble protein을 분리해서 추출하고자 합니다. > >뽑아서 2D를 하려고 합니다. > >kit를 이용해서 프락션을 했는데~ 이게 잘 뽑힌건지 확인할 방법을 모르겠어요~ > >양이 soluble에 비해 극히 적은 것으로 봐서는 제대로 한거 같은데요~ > >그리고 아무리 추출한다고 해소 soluble의 성분이 따라오는건 어쩔 수 없는 건가요?? > >만약에 컨탐이 됐다면 프로테인 양에서 차이가 있는거겠죠?? > >고수님들의 조언을 부탁드립니다. > > 질문 1. soluble과 insoluble protein을 추출했을때 잘 됐는지 확인할 수 있는 방법이 있는 것인지~~?? > >질문 2. 프락션을 했을때 soluble의 성분이 어느 정도 따라오는 것이 어쩔 수 없는 것인지~

    답변 감사합니다~