2009-05-14
org.kosen.entty.User@d1eb6ce
최훈성(hschoi77)
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topo blund vector에 클로닝하기 위해서
taq를 사용하면 안되고
pfu를 사용해야하는데
taq은 마지막에 A base를 붙이기 때문이라고 들었습니다.
일반적인 클로닝을 할 때도 이러한 차이가 있는지 알고 싶습니다.
미세한 부분에서 경험적인 부분을 알고 싶습니다.
클로닝이 안 되서 답답해서
올려봅니다.
- polymerase
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답변 3
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답변
박수제님의 답변
2009-05-14- 0
>topo blund vector에 클로닝하기 위해서 >taq를 사용하면 안되고 >pfu를 사용해야하는데 > >taq은 마지막에 A base를 붙이기 때문이라고 들었습니다. > >일반적인 클로닝을 할 때도 이러한 차이가 있는지 알고 싶습니다. > >미세한 부분에서 경험적인 부분을 알고 싶습니다. > >클로닝이 안 되서 답답해서 > >올려봅니다. 일반적으로 Taq의 경우에 있어서 protein expression을 목적으로 하는 cloning에는 사용하지 않습니다. 이유인즉, 합성되는 시컨스가 중간에 바뀌는 point mutation등이 일어날 수 있어서.. protein expression 같은 중요한(?) 실험에는 잘 사용하지 않고요.. 보통 pfu 같은 것을 사용하는데 이 polymerase 경우에는 proof기능이 있어서.. 합성 중간에 잘못된 서열이 있으면 다시 합성해 내는 거죠.. 하지만 일반적인 Taq에 비해서는 상당히 속도가 느리죠... ORF도 확인해보시고... 처음 "M" 이 잘 시작되는지도 확인해보시는 것이.. 좋을 듯 합니다. -
답변
장성재님의 답변
2009-05-15- 0
Blunt vector에 클로닝하실 때는 pfu를 T vector에 사용하실 때는 Taq를 사용하시는 것이 맞습니다. 하지만, Polymerase의 특성에 따라서 구별하는 것은 맞지만, 시판되는 Taq 제품 중에 error를 최소화하는 Proof reading 기능이 부가된 Taq도 있으니 참고하시길 바랍니다. 역시 Pfu가 보다 정확한 sequence를 얻는 것에는 강한 편입니다. 그러나, 클로닝 후에 시퀀싱을 통해 서열을 세심히 확인하는 것은 필수입니다. 각각의 polymerase의 특성을 잘 파악하셔서 목적에 맞도록 사용하시길 권장드립니다. (요즘은 인터넷 홈페이지에 접속하시면 관련 시약의 정보를 거의 모두 얻으실 수 있으니 카달로그나 이들 정보를 활용하시길 바랍니다.) >topo blund vector에 클로닝하기 위해서 >taq를 사용하면 안되고 >pfu를 사용해야하는데 > >taq은 마지막에 A base를 붙이기 때문이라고 들었습니다. > >일반적인 클로닝을 할 때도 이러한 차이가 있는지 알고 싶습니다. > >미세한 부분에서 경험적인 부분을 알고 싶습니다. > >클로닝이 안 되서 답답해서 > >올려봅니다. -
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DELETED님의 답변
2010-01-05- 0
>topo blund vector에 클로닝하기 위해서 >taq를 사용하면 안되고 >pfu를 사용해야하는데 > >taq은 마지막에 A base를 붙이기 때문이라고 들었습니다. > >일반적인 클로닝을 할 때도 이러한 차이가 있는지 알고 싶습니다. > >미세한 부분에서 경험적인 부분을 알고 싶습니다. > >클로닝이 안 되서 답답해서 > >올려봅니다. Re: 참고 사항입니다. Taq과 pfu 의 차이는 앞서 언급한것과 같습니다. 물론 pfu로 PCR을 한 후 A-tailing 과정을 거쳐 T-A cloning도 할 수 있습니다. 그리고, 요즘은 proof reading기능을 갖춘 taq들도 판매를 하고 있으니 cloning이 보다 용이합니다.