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웨스턴 시행 시 protein 깨짐 현상 질문입니다.

2009-05-17 org.kosen.entty.User@78a9c2d2 최하나(only1hana)
  • 4

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실험실 전체가 웨스턴이 제대로 안되서 난항을 겪고 있습니다. 정확히 저번주 목요일까지는 멀쩡하게 잘 되다가 금요일부터 실시한 웨스턴에서 문제가 발생합니다. 로딩시 프로테인은 줄 맞춰서 잘 내려오지만, 마커 컬러가 슬슬 흐려지기 시작하면서 나중에는 마커가 거의 안보입니다. 트랜스퍼 후 폰슈 염색 하면 더 가관입니다. 마커도 다 깨져서 흐릿흐릿한 것은 물론, 15% gel에 내려도 프로테인이 gel의 1/5도 다 보이지 않습니다. 아래사이즈는 다 깨졌거나, 내려오지 못했거나 뭐 그런 것 같습니다. (사진이 폰 사진이라 흐리긴 한데 15% gel인데 저정도 입니다) 프로테인 문제이면 마커는 멀쩡해야하는데, 아무래도 gel 만든 시약들 문제이거나 버퍼들 문제인 것 같은데.. 충격적인 것은 문제가 발생한 저번주 목요일과 금요일 사이에는 새로 만든 시약이 없다는 것이지요. 즉, 목요일과 금요일에 실시한 실험은 모두다 같은 조건, 같은 시약으로 했습니다. 시약들 액티비티가 떨어졌다고 쳐도.. 하루사이에 확 떨어질 수가 있는 것인가요?? 시약과 버퍼들을 모두다 새로 만들면 문제가 해결 될까요?
  • western blot
  • protein
  • sds
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답변 4
  • 답변

    이용원님의 답변

    2009-05-18
    • 0
    사진이 흐릿해서 명확하지는 않지만, SDS-PAGE 제조시 사용된 running gel buffer의 pH 문제가 아닐까 싶습니다. 사용하신 buffer 들의 pH 확인 해보시기 바랍니다. >실험실 전체가 웨스턴이 제대로 안되서 난항을 겪고 있습니다. >정확히 저번주 목요일까지는 멀쩡하게 잘 되다가 >금요일부터 실시한 웨스턴에서 문제가 발생합니다. > >로딩시 프로테인은 줄 맞춰서 잘 내려오지만, >마커 컬러가 슬슬 흐려지기 시작하면서 나중에는 마커가 거의 안보입니다. >트랜스퍼 후 폰슈 염색 하면 더 가관입니다. >마커도 다 깨져서 흐릿흐릿한 것은 물론, >15% gel에 내려도 프로테인이 gel의 1/5도 다 보이지 않습니다. >아래사이즈는 다 깨졌거나, 내려오지 못했거나 뭐 그런 것 같습니다. >(사진이 폰 사진이라 흐리긴 한데 15% gel인데 저정도 입니다) > >프로테인 문제이면 마커는 멀쩡해야하는데, >아무래도 gel 만든 시약들 문제이거나 버퍼들 문제인 것 같은데.. >충격적인 것은 문제가 발생한 저번주 목요일과 금요일 사이에는 >새로 만든 시약이 없다는 것이지요. >즉, 목요일과 금요일에 실시한 실험은 모두다 같은 조건, 같은 시약으로 했습니다. >시약들 액티비티가 떨어졌다고 쳐도.. >하루사이에 확 떨어질 수가 있는 것인가요?? > >시약과 버퍼들을 모두다 새로 만들면 문제가 해결 될까요?
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    사진이 흐릿해서 명확하지는 않지만, SDS-PAGE 제조시 사용된 running gel buffer의 pH 문제가 아닐까 싶습니다. 사용하신 buffer 들의 pH 확인 해보시기 바랍니다. >실험실 전체가 웨스턴이 제대로 안되서 난항을 겪고 있습니다. >정확히 저번주 목요일까지는 멀쩡하게 잘 되다가 >금요일부터 실시한 웨스턴에서 문제가 발생합니다. > >로딩시 프로테인은 줄 맞춰서 잘 내려오지만, >마커 컬러가 슬슬 흐려지기 시작하면서 나중에는 마커가 거의 안보입니다. >트랜스퍼 후 폰슈 염색 하면 더 가관입니다. >마커도 다 깨져서 흐릿흐릿한 것은 물론, >15% gel에 내려도 프로테인이 gel의 1/5도 다 보이지 않습니다. >아래사이즈는 다 깨졌거나, 내려오지 못했거나 뭐 그런 것 같습니다. >(사진이 폰 사진이라 흐리긴 한데 15% gel인데 저정도 입니다) > >프로테인 문제이면 마커는 멀쩡해야하는데, >아무래도 gel 만든 시약들 문제이거나 버퍼들 문제인 것 같은데.. >충격적인 것은 문제가 발생한 저번주 목요일과 금요일 사이에는 >새로 만든 시약이 없다는 것이지요. >즉, 목요일과 금요일에 실시한 실험은 모두다 같은 조건, 같은 시약으로 했습니다. >시약들 액티비티가 떨어졌다고 쳐도.. >하루사이에 확 떨어질 수가 있는 것인가요?? > >시약과 버퍼들을 모두다 새로 만들면 문제가 해결 될까요?
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    정근일님의 답변

    2009-05-20
    • 0
    위에 분이 답변하신대로 SDS-PAGE 때 사용된 running gel buffer의 pH 문제인것 같습니다 저의 경우엔 acrylamide mix의 pH 문제였던적도 있었습니다. 참고바랍니당^^
    답변수정
    위에 분이 답변하신대로 SDS-PAGE 때 사용된 running gel buffer의 pH 문제인것 같습니다 저의 경우엔 acrylamide mix의 pH 문제였던적도 있었습니다. 참고바랍니당^^
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    전정용님의 답변

    2009-06-30
    • 0
    running buffer의 pH에 추가하여 gel제작시에 Tris의 pH도 같이 확인해 보시는게 좋을듯합니다. >실험실 전체가 웨스턴이 제대로 안되서 난항을 겪고 있습니다. >정확히 저번주 목요일까지는 멀쩡하게 잘 되다가 >금요일부터 실시한 웨스턴에서 문제가 발생합니다. > >로딩시 프로테인은 줄 맞춰서 잘 내려오지만, >마커 컬러가 슬슬 흐려지기 시작하면서 나중에는 마커가 거의 안보입니다. >트랜스퍼 후 폰슈 염색 하면 더 가관입니다. >마커도 다 깨져서 흐릿흐릿한 것은 물론, >15% gel에 내려도 프로테인이 gel의 1/5도 다 보이지 않습니다. >아래사이즈는 다 깨졌거나, 내려오지 못했거나 뭐 그런 것 같습니다. >(사진이 폰 사진이라 흐리긴 한데 15% gel인데 저정도 입니다) > >프로테인 문제이면 마커는 멀쩡해야하는데, >아무래도 gel 만든 시약들 문제이거나 버퍼들 문제인 것 같은데.. >충격적인 것은 문제가 발생한 저번주 목요일과 금요일 사이에는 >새로 만든 시약이 없다는 것이지요. >즉, 목요일과 금요일에 실시한 실험은 모두다 같은 조건, 같은 시약으로 했습니다. >시약들 액티비티가 떨어졌다고 쳐도.. >하루사이에 확 떨어질 수가 있는 것인가요?? > >시약과 버퍼들을 모두다 새로 만들면 문제가 해결 될까요?
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    running buffer의 pH에 추가하여 gel제작시에 Tris의 pH도 같이 확인해 보시는게 좋을듯합니다. >실험실 전체가 웨스턴이 제대로 안되서 난항을 겪고 있습니다. >정확히 저번주 목요일까지는 멀쩡하게 잘 되다가 >금요일부터 실시한 웨스턴에서 문제가 발생합니다. > >로딩시 프로테인은 줄 맞춰서 잘 내려오지만, >마커 컬러가 슬슬 흐려지기 시작하면서 나중에는 마커가 거의 안보입니다. >트랜스퍼 후 폰슈 염색 하면 더 가관입니다. >마커도 다 깨져서 흐릿흐릿한 것은 물론, >15% gel에 내려도 프로테인이 gel의 1/5도 다 보이지 않습니다. >아래사이즈는 다 깨졌거나, 내려오지 못했거나 뭐 그런 것 같습니다. >(사진이 폰 사진이라 흐리긴 한데 15% gel인데 저정도 입니다) > >프로테인 문제이면 마커는 멀쩡해야하는데, >아무래도 gel 만든 시약들 문제이거나 버퍼들 문제인 것 같은데.. >충격적인 것은 문제가 발생한 저번주 목요일과 금요일 사이에는 >새로 만든 시약이 없다는 것이지요. >즉, 목요일과 금요일에 실시한 실험은 모두다 같은 조건, 같은 시약으로 했습니다. >시약들 액티비티가 떨어졌다고 쳐도.. >하루사이에 확 떨어질 수가 있는 것인가요?? > >시약과 버퍼들을 모두다 새로 만들면 문제가 해결 될까요?
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    DELETED님의 답변

    2009-08-21
    • 0
    >실험실 전체가 웨스턴이 제대로 안되서 난항을 겪고 있습니다. >정확히 저번주 목요일까지는 멀쩡하게 잘 되다가 >금요일부터 실시한 웨스턴에서 문제가 발생합니다. > >로딩시 프로테인은 줄 맞춰서 잘 내려오지만, >마커 컬러가 슬슬 흐려지기 시작하면서 나중에는 마커가 거의 안보입니다. >트랜스퍼 후 폰슈 염색 하면 더 가관입니다. >마커도 다 깨져서 흐릿흐릿한 것은 물론, >15% gel에 내려도 프로테인이 gel의 1/5도 다 보이지 않습니다. >아래사이즈는 다 깨졌거나, 내려오지 못했거나 뭐 그런 것 같습니다. >(사진이 폰 사진이라 흐리긴 한데 15% gel인데 저정도 입니다) > >프로테인 문제이면 마커는 멀쩡해야하는데, >아무래도 gel 만든 시약들 문제이거나 버퍼들 문제인 것 같은데.. >충격적인 것은 문제가 발생한 저번주 목요일과 금요일 사이에는 >새로 만든 시약이 없다는 것이지요. >즉, 목요일과 금요일에 실시한 실험은 모두다 같은 조건, 같은 시약으로 했습니다. >시약들 액티비티가 떨어졌다고 쳐도.. >하루사이에 확 떨어질 수가 있는 것인가요?? > >시약과 버퍼들을 모두다 새로 만들면 문제가 해결 될까요? Re: pH문제 일수도 있겠으나 괜찮은것이 갑자기 그렇다면, 혹시 prtease가 solution에 contamination되어 있진 않을까요.. 일단 모든 batch를 바꾸는 것이 좋을것 같습니다.
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    >실험실 전체가 웨스턴이 제대로 안되서 난항을 겪고 있습니다. >정확히 저번주 목요일까지는 멀쩡하게 잘 되다가 >금요일부터 실시한 웨스턴에서 문제가 발생합니다. > >로딩시 프로테인은 줄 맞춰서 잘 내려오지만, >마커 컬러가 슬슬 흐려지기 시작하면서 나중에는 마커가 거의 안보입니다. >트랜스퍼 후 폰슈 염색 하면 더 가관입니다. >마커도 다 깨져서 흐릿흐릿한 것은 물론, >15% gel에 내려도 프로테인이 gel의 1/5도 다 보이지 않습니다. >아래사이즈는 다 깨졌거나, 내려오지 못했거나 뭐 그런 것 같습니다. >(사진이 폰 사진이라 흐리긴 한데 15% gel인데 저정도 입니다) > >프로테인 문제이면 마커는 멀쩡해야하는데, >아무래도 gel 만든 시약들 문제이거나 버퍼들 문제인 것 같은데.. >충격적인 것은 문제가 발생한 저번주 목요일과 금요일 사이에는 >새로 만든 시약이 없다는 것이지요. >즉, 목요일과 금요일에 실시한 실험은 모두다 같은 조건, 같은 시약으로 했습니다. >시약들 액티비티가 떨어졌다고 쳐도.. >하루사이에 확 떨어질 수가 있는 것인가요?? > >시약과 버퍼들을 모두다 새로 만들면 문제가 해결 될까요? Re: pH문제 일수도 있겠으나 괜찮은것이 갑자기 그렇다면, 혹시 prtease가 solution에 contamination되어 있진 않을까요.. 일단 모든 batch를 바꾸는 것이 좋을것 같습니다.
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