2009-06-04
org.kosen.entty.User@39c7ff87
김소정(soratopia)
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궁금해서 그러는데요~
일반적으로 파라포름알데하이드에 고정을 하고나서 DAPI로 염색하잖아여?
그런데 제가 알고있기로는 DAPI가 살아있는 세포의 핵에 들어간다고 알고있는데..
DAPI로 염색하고나서 고정을 하면 않되나요?
- dapi
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답변 2
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답변
장성재님의 답변
2009-06-05- 0
물론 DAPI는 살아있는 세포막을 통과할 수 있기 때문에 살아있는 세포의 핵을 염색할 때 사용하실 수 있습니다. 하지만, 일반적으로 DAPI를 이용한 counter staining은 항체를 이용한 면역 형광 염색법에서 항체와 이에 특이적으로 반응하는 일반적으로 많이 사용하는 Alexa488 (green), Alexa594 (red) 등과 더불어 비교 형광 염색을 하기 위한 것이므로, 다른 염색 절차를 끝낸 후에 사용하시는 것이 좋습니다 (DAPI; blue). 항체를 이용한 염색 과정에서는 여러번의 Washing 절차가 뒤따르므로, DAPI 염색을 먼저 하신 경우에는 DAPI의 형광성이 급격히 떨어지겠지요. 참고로 DAPI와 유사한 형광성을 나타내는 핵 염색용 시약으로는 Hoechst라는 것도 있습니다. 이것도 살아있는 세포에 직접 사용하실 수 있습니다. >궁금해서 그러는데요~ > >일반적으로 파라포름알데하이드에 고정을 하고나서 DAPI로 염색하잖아여? > >그런데 제가 알고있기로는 DAPI가 살아있는 세포의 핵에 들어간다고 알고있는데.. > >DAPI로 염색하고나서 고정을 하면 않되나요? > > -
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전정용님의 답변
2009-06-30- 0
PFA로 고정하셔도 전혀 상관없습니다. Vector 사의 H1500 추천해드리고 싶네요. 다른 형광 Ab 처리 하신다음에 mounting과정에서 위 용액으로 하시면 다른 처리 없이 핵을 확인하실수 있을겁니다. >궁금해서 그러는데요~ > >일반적으로 파라포름알데하이드에 고정을 하고나서 DAPI로 염색하잖아여? > >그런데 제가 알고있기로는 DAPI가 살아있는 세포의 핵에 들어간다고 알고있는데.. > >DAPI로 염색하고나서 고정을 하면 않되나요? > >