2009-08-14
org.kosen.entty.User@79b975f0
권혁이(ttwh2)
- 2
paraffin으로 고정하여 section한 mouse skin sample을 가지고 면역염색을 시행하여 조건을 잡는 과정 중 어려움이있어 고수님들의 부탁을 받고자 글을 올립니다.
일단 mouse skin에서 epidermis에 있는 keratin5 는 염색이 잘되는데 문제는 Flag으로는 염색이 잘 되지 않아 flag 염색에 있어 질문을 하고자 합니다. 현재 저희가 쓰는 flag은 sigma 것으로 면역염색시 1:100으로 dilution 하여 사용하고 있습니다.
secondary Ab는 Alex 488 을 사용하여 detection하는데 잘 되지 않아 문제입니다. 면역 형광 염색에 있어 Ab가 잘 detection 되지 않을때 사용하는 방법이 있거나, Flag으로 면역 형광염색 해보신 분이 있다면 protocol 좀 알려주세요.
부탁드립니다.
- 면역 조직 형광 염색
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변!
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 2
-
답변
DELETED님의 답변
2009-08-14- 0
>paraffin으로 고정하여 section한 mouse skin sample을 가지고 면역염색을 시행하여 조건을 잡는 과정 중 어려움이있어 고수님들의 부탁을 받고자 글을 올립니다. > >일단 mouse skin에서 epidermis에 있는 keratin5 는 염색이 잘되는데 문제는 Flag으로는 염색이 잘 되지 않아 flag 염색에 있어 질문을 하고자 합니다. 현재 저희가 쓰는 flag은 sigma 것으로 면역염색시 1:100으로 dilution 하여 사용하고 있습니다. > >secondary Ab는 Alex 488 을 사용하여 detection하는데 잘 되지 않아 문제입니다. 면역 형광 염색에 있어 Ab가 잘 detection 되지 않을때 사용하는 방법이 있거나, Flag으로 면역 형광염색 해보신 분이 있다면 protocol 좀 알려주세요. > >부탁드립니다. Re: FLAG이라함은 tag을 말씀하시는건가요? 그렇다면 endogenous protein이 아니라, transgenic 인가요? FLAG Ab로 IHC를 해본적은 없지만, skin에서 K5같은 marker protein이 잡혔으니.. block의 문제는 아닌것 같네요.. antigen retrival 의 문제도 아닌것 같구요.. western으로 먼저 확인해 보는건 어떨까요..정말 tagging protein이 존재하는지.. 아니면, target protein 자체 Ab는 없는건가요? -
답변
신동욱님의 답변
2010-01-10- 0
>paraffin으로 고정하여 section한 mouse skin sample을 가지고 면역염색을 시행하여 조건을 잡는 과정 중 어려움이있어 고수님들의 부탁을 받고자 글을 올립니다. > >일단 mouse skin에서 epidermis에 있는 keratin5 는 염색이 잘되는데 문제는 Flag으로는 염색이 잘 되지 않아 flag 염색에 있어 질문을 하고자 합니다. 현재 저희가 쓰는 flag은 sigma 것으로 면역염색시 1:100으로 dilution 하여 사용하고 있습니다. > >secondary Ab는 Alex 488 을 사용하여 detection하는데 잘 되지 않아 문제입니다. 면역 형광 염색에 있어 Ab가 잘 detection 되지 않을때 사용하는 방법이 있거나, Flag으로 면역 형광염색 해보신 분이 있다면 protocol 좀 알려주세요. Flag로 염색을 어떻게 할 수 있는지 궁금합니다. Flag를 사용하는 경우는 특정 단백질-Flag로 과발현시킨 후에 Flag tag을 사용하는 데 위의 실험 샘플은 mouse skin 이라고 하니, 불가능하단 생각이 듭니다