2009-08-24
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최재원(jaen2046)
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single cell level로 RT-PCR (not real time PCR)을 해보신 분께 protocol을 비롯한 자문을 구하고 싶습니다.
single cell에서 RNA isolation부터 PCR step 까지 가능한 자세한 정보가 필요합니다.
또한 그와 관련된 어떤 장비가 필요한지에 대한 조언과 관련 paper를 제공해 주시면 더욱 감사하겠습니다.
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답변 3
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답변
박수제님의 답변
2009-08-24- 0
>single cell level로 RT-PCR (not real time PCR)을 해보신 분께 protocol을 비롯한 자문을 구하고 싶습니다. >single cell에서 RNA isolation부터 PCR step 까지 가능한 자세한 정보가 필요합니다. >또한 그와 관련된 어떤 장비가 필요한지에 대한 조언과 관련 paper를 제공해 주시면 더욱 감사하겠습니다. 답변이 될지 모르겠습니다. 우선 single cell 로 부터 DNA를 증폭하기 위해서는 MDA 기법을 사용합니다만... RNA라면 isolation하는 단계부터 힘들어 질 것 같네요.. 물론 DNA의 경우에도 isolation이 힘들어 freez-thawing 기법을 사용합니다만... 정 안되신다면.. DNA를 뽑으시고 in vitro transcription을 하시면 안될런지요?? -
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장성재님의 답변
2009-08-24- 0
1-50 cells로부터 분리된 RNA (10-500 pg)로부터 amplified RNA (aRNA)를 만드는 kit가 있습니다. 밑의 웹사이트를 참고하시길 바랍니다. http://www.epibio.com/item.asp?ID=543 >single cell level로 RT-PCR (not real time PCR)을 해보신 분께 protocol을 비롯한 자문을 구하고 싶습니다. >single cell에서 RNA isolation부터 PCR step 까지 가능한 자세한 정보가 필요합니다. >또한 그와 관련된 어떤 장비가 필요한지에 대한 조언과 관련 paper를 제공해 주시면 더욱 감사하겠습니다. -
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박동현님의 답변
2009-08-27- 0
전에 실험실에서 옆에 일하던 포스닥이 invitrogen에서 나온 single cell RT-PCR kit를 사용했었습니다. 물론 high copy number를 갖는 gene들은 별 문제가 없지만, low copy number는 늘 문제였구요. isolation에서 부터 RT reaction까지 한 튜브에서 진행했던 것으로 기억합니다. >single cell level로 RT-PCR (not real time PCR)을 해보신 분께 protocol을 비롯한 자문을 구하고 싶습니다. >single cell에서 RNA isolation부터 PCR step 까지 가능한 자세한 정보가 필요합니다. >또한 그와 관련된 어떤 장비가 필요한지에 대한 조언과 관련 paper를 제공해 주시면 더욱 감사하겠습니다.