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지식나눔

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western 확인할때요 total form과 phospho form에서요 그리고 농도에서요

2009-08-24 org.kosen.entty.User@1dd6248c 황혜정(dianastar)
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세포에서 단백질 확인할때요,,,, 1. phospho form이 total form에 대해서... 어떻게 발현되는지에 따라서 활성화가 일어 났다고 보잖아요,,, drug을 처리하고, 확인하면,,, total form이 drug을 처리 한 것과 처리하지 않은 것에서 같게 나와야 하는데 약처리 한 것에서 total form이 감소한다면 어떻게 해석해야 할까요?? 2. 100mM stock을 가지고 있습니다. 이걸 100ul에 1ul 씩 처리해서 0.25/0.5/1/2/5mM 로 최종 맞추고자 하면 100mM stock을 어떻게 나눠야 할지 헷갈려서요.. 아시는 분 알려주세요
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    DELETED님의 답변

    2009-08-24
    • 0
    >세포에서 단백질 확인할때요,,,, > >1. phospho form이 total form에 대해서... 어떻게 발현되는지에 따라서 활성화가 일어 났다고 보잖아요,,, > >drug을 처리하고, 확인하면,,, total form이 drug을 처리 한 것과 처리하지 않은 것에서 같게 나와야 하는데 약처리 한 것에서 total form이 감소한다면 > >어떻게 해석해야 할까요?? > >2. 100mM stock을 가지고 있습니다. >이걸 100ul에 1ul 씩 처리해서 0.25/0.5/1/2/5mM 로 최종 맞추고자 하면 100mM stock을 어떻게 나눠야 할지 헷갈려서요.. >아시는 분 알려주세요 > Re:1. actin이나 tubulin 같은 loading control은 어떻게 나왔나요... 만약 loading control 이 같다면, 그 drug 이 보고자 하는 molecule의 kinase 혹은 phospatase (phosphoform이 줄었는지 늘었는지를 모르니까요..)만을 조절하는 것이 아니라, trnascriptional or translational level을 조절하여 발현량 자체를 조절할 수도 있을것 같습니다.
    답변수정
    >세포에서 단백질 확인할때요,,,, > >1. phospho form이 total form에 대해서... 어떻게 발현되는지에 따라서 활성화가 일어 났다고 보잖아요,,, > >drug을 처리하고, 확인하면,,, total form이 drug을 처리 한 것과 처리하지 않은 것에서 같게 나와야 하는데 약처리 한 것에서 total form이 감소한다면 > >어떻게 해석해야 할까요?? > >2. 100mM stock을 가지고 있습니다. >이걸 100ul에 1ul 씩 처리해서 0.25/0.5/1/2/5mM 로 최종 맞추고자 하면 100mM stock을 어떻게 나눠야 할지 헷갈려서요.. >아시는 분 알려주세요 > Re:1. actin이나 tubulin 같은 loading control은 어떻게 나왔나요... 만약 loading control 이 같다면, 그 drug 이 보고자 하는 molecule의 kinase 혹은 phospatase (phosphoform이 줄었는지 늘었는지를 모르니까요..)만을 조절하는 것이 아니라, trnascriptional or translational level을 조절하여 발현량 자체를 조절할 수도 있을것 같습니다.
    황혜정(dianastar) 2009-08-25

    tubulin량은 같게 나왔거든요,,제가 보고자 한 molecule이 TSC2였습니다. 혹시 이 TSC2가 다른 molecule에 비해 다른 점이 있을까요?

    DELETED(kimjeongki) 2009-08-25

    글쎄요...만약 몇번해도 loading control이 같다면...그 drug이 TSC2의 expression량을 조절할 수도 있을 것 같습니다. Drug이 TSC2의 translational level을 조절하는것을 보는것은 좀더 복잡하고 여러가지 정황증거가 필요하므로, 일단은 간단히 test와 control에서 RT-PCR이나, real-time PCR로 TSC2의 transcript level을 확인해보시는게 좋을 것 같습니다

    황혜정(dianastar) 2009-08-26

    아무래도 더 loading을 해서 확인해 보는것이 더 정확할 것 같습니다..답변감사합니다

    DELETED(kimjeongki) 2009-08-26

    그 molecule은 저보다는 선생님이 잘 아시겠죠..^^ 그 data가 분명하다면, 처리하신 drug이 TSC2의 phosphorylation뿐만 아니라 expression에 영향을 주지 않나 하는것이 제 생각입니다.

  • 답변

    신동욱님의 답변

    2010-01-10
    • 0
    >세포에서 단백질 확인할때요,,,, > >1. phospho form이 total form에 대해서... 어떻게 발현되는지에 따라서 활성화가 일어 났다고 보잖아요,,, > >drug을 처리하고, 확인하면,,, total form이 drug을 처리 한 것과 처리하지 않은 것에서 같게 나와야 하는데 약처리 한 것에서 total form이 감소한다면 > >어떻게 해석해야 할까요?? ---> actin, tubulin같은 loading control이 필요합니다. >2. 100mM stock을 가지고 있습니다. >이걸 100ul에 1ul 씩 처리해서 0.25/0.5/1/2/5mM 로 최종 맞추고자 하면 100mM stock을 어떻게 나눠야 할지 헷갈려서요.. >아시는 분 알려주세요 ---> serial dilution을 하면 됩니다. 1 ul를 넣으면, 1 mM이 일단 되고, 0.5 ul를 넣으면, 0.5 mM은 쉽게 구하게 되는 것이구용.. 2 mM, 5 mM의 경우에는 2, 5 ul를 넣으셔야 됩니다. 천편일률적으로 100 ul에 1 ul를 넣으신다면, 위의 5가지 농도의 100배 stock으로 만드셔야 되겠네용
    답변수정
    >세포에서 단백질 확인할때요,,,, > >1. phospho form이 total form에 대해서... 어떻게 발현되는지에 따라서 활성화가 일어 났다고 보잖아요,,, > >drug을 처리하고, 확인하면,,, total form이 drug을 처리 한 것과 처리하지 않은 것에서 같게 나와야 하는데 약처리 한 것에서 total form이 감소한다면 > >어떻게 해석해야 할까요?? ---> actin, tubulin같은 loading control이 필요합니다. >2. 100mM stock을 가지고 있습니다. >이걸 100ul에 1ul 씩 처리해서 0.25/0.5/1/2/5mM 로 최종 맞추고자 하면 100mM stock을 어떻게 나눠야 할지 헷갈려서요.. >아시는 분 알려주세요 ---> serial dilution을 하면 됩니다. 1 ul를 넣으면, 1 mM이 일단 되고, 0.5 ul를 넣으면, 0.5 mM은 쉽게 구하게 되는 것이구용.. 2 mM, 5 mM의 경우에는 2, 5 ul를 넣으셔야 됩니다. 천편일률적으로 100 ul에 1 ul를 넣으신다면, 위의 5가지 농도의 100배 stock으로 만드셔야 되겠네용
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