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지식나눔

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ELISA PROTOCOL에 대한 조언 요청

2009-10-26 org.kosen.entty.User@62a97b82 원아영(way1981)
  • 2
ELISA 실험을 계획하고 있습니다. COMPETITIVE ELISA 법으로, SAMPLE에 측정하려는 항체 혹은 항원의 농도가 정량 범위에서 포함되지 않아서 검출되지 않을 것을 우려하고 있습니다. (물론 감도가 좋은 ELISA kit를 사용할 수도 있으나..) protocol 상에서 sample 50 ul + ab 50 ul를 넣어 반응시킨다고 할 때, 1)sample의 양을 100~150 ul를 적용할 때, 어느 정도 증가된 값을 기대할 수도 있을까요? 2)sample의 양이 증가되면, 함께 넣어줘야 하는 ab의 양도 동일하게 증가시켜주어야 하는지요? 아직 부족한 점이 많아 하나하나 진행하는데도 어렵네요... 조엄 부탁드립니다. 감사합니다.
  • ELISA
  • PROTOCOL
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답변 2
  • 답변

    김동현님의 답변

    2009-10-28
    • 0
    LOD (Limit of detection)가 높아서 낮은 농도의 항체 또는 항원을 검출하기 어려운 경우, capture Ab의 양을 늘리거나 incubation하는 시간을 늘려주면 도움이 됩니다. competitor로 사용하는 것이 항체인지 항원인지를 명확하게 언급해주시면 답변하기에 도움이 될 것 같습니다. >ELISA 실험을 계획하고 있습니다. >COMPETITIVE ELISA 법으로, >SAMPLE에 측정하려는 항체 혹은 항원의 농도가 정량 범위에서 포함되지 않아서 검출되지 않을 것을 우려하고 있습니다. >(물론 감도가 좋은 ELISA kit를 사용할 수도 있으나..) >protocol 상에서 sample 50 ul + ab 50 ul를 넣어 반응시킨다고 할 때, > >1)sample의 양을 100~150 ul를 적용할 때, >어느 정도 증가된 값을 기대할 수도 있을까요? >2)sample의 양이 증가되면, 함께 넣어줘야 하는 ab의 양도 동일하게 증가시켜주어야 하는지요? > > >아직 부족한 점이 많아 하나하나 진행하는데도 어렵네요... >조엄 부탁드립니다. > >감사합니다.
    답변수정
    LOD (Limit of detection)가 높아서 낮은 농도의 항체 또는 항원을 검출하기 어려운 경우, capture Ab의 양을 늘리거나 incubation하는 시간을 늘려주면 도움이 됩니다. competitor로 사용하는 것이 항체인지 항원인지를 명확하게 언급해주시면 답변하기에 도움이 될 것 같습니다. >ELISA 실험을 계획하고 있습니다. >COMPETITIVE ELISA 법으로, >SAMPLE에 측정하려는 항체 혹은 항원의 농도가 정량 범위에서 포함되지 않아서 검출되지 않을 것을 우려하고 있습니다. >(물론 감도가 좋은 ELISA kit를 사용할 수도 있으나..) >protocol 상에서 sample 50 ul + ab 50 ul를 넣어 반응시킨다고 할 때, > >1)sample의 양을 100~150 ul를 적용할 때, >어느 정도 증가된 값을 기대할 수도 있을까요? >2)sample의 양이 증가되면, 함께 넣어줘야 하는 ab의 양도 동일하게 증가시켜주어야 하는지요? > > >아직 부족한 점이 많아 하나하나 진행하는데도 어렵네요... >조엄 부탁드립니다. > >감사합니다.
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    원아영님의 답변

    2009-10-30
    • 0
    >ELISA 실험을 계획하고 있습니다. >COMPETITIVE ELISA 법으로, >SAMPLE에 측정하려는 항체 혹은 항원의 농도가 정량 범위에서 포함되지 않아서 검출되지 않을 것을 우려하고 있습니다. >(물론 감도가 좋은 ELISA kit를 사용할 수도 있으나..) >protocol 상에서 sample 50 ul + ab 50 ul를 넣어 반응시킨다고 할 때, > >1)sample의 양을 100~150 ul를 적용할 때, >어느 정도 증가된 값을 기대할 수도 있을까요? >2)sample의 양이 증가되면, 함께 넣어줘야 하는 ab의 양도 동일하게 증가시켜주어야 하는지요? > > >아직 부족한 점이 많아 하나하나 진행하는데도 어렵네요... >조엄 부탁드립니다. > >감사합니다. Test 1> Coupling Antigen으로 코팅된 well에 sample 50ul을 넣고 동시에 antibody 50 ul를 넣습니다. 다음 enzyme이 label된 2차 Ab 100ul를 넣습니다. 한 시간 반응 시킨 후, Substrate를 넣고 발색시킵니다. Test 2> sheep Ab to Rabbit IgG가 코팅된 well에 여기에 sample 50ul을 넣고 Conjugate-HRP 25ul를 넣고 Ab 25ul를 넣습니다. 한 시간 반응 시킨 후, Substrate를 넣고 발색시킵니다. Test 3> 시험하려는 단백질이 코팅된 well에 sample 20ul를 넣습니다. 그리고 anti-Protein-HRP를 80ul를 넣습니다. 한시간 반응 후, Substrate를 넣고 발색시킵니다. 상기와 같은 각 test에서 정량 한계에 미치지 못하여 Not Detection 될 것으로 보이는데, (즉, OD=2.3이상으로 올라갈 것으로 예상) 어떻게 해야 범위내로 끌어내릴 수 있을까요? 혹은 Sample을 농충하는 방법을 고려하고 있는데, 이전에 기본 ELISA protocol상에서 조정할 수 있는 구체적인 방법을 부탁드립니다. 감사합니다.
    답변수정
    >ELISA 실험을 계획하고 있습니다. >COMPETITIVE ELISA 법으로, >SAMPLE에 측정하려는 항체 혹은 항원의 농도가 정량 범위에서 포함되지 않아서 검출되지 않을 것을 우려하고 있습니다. >(물론 감도가 좋은 ELISA kit를 사용할 수도 있으나..) >protocol 상에서 sample 50 ul + ab 50 ul를 넣어 반응시킨다고 할 때, > >1)sample의 양을 100~150 ul를 적용할 때, >어느 정도 증가된 값을 기대할 수도 있을까요? >2)sample의 양이 증가되면, 함께 넣어줘야 하는 ab의 양도 동일하게 증가시켜주어야 하는지요? > > >아직 부족한 점이 많아 하나하나 진행하는데도 어렵네요... >조엄 부탁드립니다. > >감사합니다. Test 1> Coupling Antigen으로 코팅된 well에 sample 50ul을 넣고 동시에 antibody 50 ul를 넣습니다. 다음 enzyme이 label된 2차 Ab 100ul를 넣습니다. 한 시간 반응 시킨 후, Substrate를 넣고 발색시킵니다. Test 2> sheep Ab to Rabbit IgG가 코팅된 well에 여기에 sample 50ul을 넣고 Conjugate-HRP 25ul를 넣고 Ab 25ul를 넣습니다. 한 시간 반응 시킨 후, Substrate를 넣고 발색시킵니다. Test 3> 시험하려는 단백질이 코팅된 well에 sample 20ul를 넣습니다. 그리고 anti-Protein-HRP를 80ul를 넣습니다. 한시간 반응 후, Substrate를 넣고 발색시킵니다. 상기와 같은 각 test에서 정량 한계에 미치지 못하여 Not Detection 될 것으로 보이는데, (즉, OD=2.3이상으로 올라갈 것으로 예상) 어떻게 해야 범위내로 끌어내릴 수 있을까요? 혹은 Sample을 농충하는 방법을 고려하고 있는데, 이전에 기본 ELISA protocol상에서 조정할 수 있는 구체적인 방법을 부탁드립니다. 감사합니다.
    김동현(uri97) 2009-11-02

    메일로 답변 보내드렸습니다. 한번 확인해보세요.

    원아영(way1981) 2009-11-04

    감사합니다. 건강 유의하세요.

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