2010-01-06
org.kosen.entty.User@673755eb
양재원(tlftlf2)
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TUNEL kit를 이용하여 apoptosis를 확인하고있습니다. (16um cryosection 조직)
조직을 염색할때 형광으로 관찰할때는 staining이 선명하게 잘되나, 그후에 HRP를 붙이고 DAB으로 발색하고 나면 발색이 거의 되지않아 detection이 안됩니다.
확인해본결과 DAB이나 HRP의 activity는 문제가 없고, TdT enzyme labeling후의 형광관찰도 문제가 없습니다. 다만 후에 HRP를 붙인후 DAB 발색하고 나면 detection이 안됩니다. (HRP, DAB반응시간을 늘려보아도...)
- TUNEL
- apoptosis
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답변 4
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안길홍님의 답변
2010-01-06- 0
금속 물질의 detection에도 DBA를 많이 사용합니다. DBA의 특성상 사용시 H2O2를 같이 사용하여 주어야 발색이 선명합니다.즉 DBA가 산화되어 일어나게 되는 결과입니다. Fe: Dark brown color,Cu, Co등 -
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이상후님의 답변
2010-01-06- 0
>TUNEL kit를 이용하여 apoptosis를 확인하고있습니다. (16um cryosection 조직) >조직을 염색할때 형광으로 관찰할때는 staining이 선명하게 잘되나, 그후에 HRP를 붙이고 DAB으로 발색하고 나면 발색이 거의 되지않아 detection이 안됩니다. >확인해본결과 DAB이나 HRP의 activity는 문제가 없고, TdT enzyme labeling후의 형광관찰도 문제가 없습니다. 다만 후에 HRP를 붙인후 DAB 발색하고 나면 detection이 안됩니다. (HRP, DAB반응시간을 늘려보아도...) kit를 사용하여 테스트 하시는 경우에는, SOP대로 했을 거라 생각이 됩니다. 다만, biotinylated nucleotide를 사용하신 경우, HRP을 단독으로 사용하신것인지 Streptavidin-HRP를 사용하셨는지 확인이 필요할 거 같군요. 물론 후자를 사용했을 것으로 생각됩니다. 후자의 경우는, 반드시 4'C에 보관해야 되고 절대 light에 노출시켜서는 안됩니다. 나머지 kit의 경우도 -20'C에서 보관해야 되는데 보관만 잘하면 1년의 stability가 보장됩니다. 이러한 기본적인 사항외에도 labeling 단계에서도 주의점이 필요한데, 이 부분은 첨부해 드리는 commerical kit의 guideline을 읽어보시고 혹시 놓치 부분이 있는지 확인해 보세요. -
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DELETED님의 답변
2010-01-08- 0
>TUNEL kit를 이용하여 apoptosis를 확인하고있습니다. (16um cryosection 조직) >조직을 염색할때 형광으로 관찰할때는 staining이 선명하게 잘되나, 그후에 HRP를 붙이고 DAB으로 발색하고 나면 발색이 거의 되지않아 detection이 안됩니다. >확인해본결과 DAB이나 HRP의 activity는 문제가 없고, TdT enzyme labeling후의 형광관찰도 문제가 없습니다. 다만 후에 HRP를 붙인후 DAB 발색하고 나면 detection이 안됩니다. (HRP, DAB반응시간을 늘려보아도...) >Re: DAB 발색시 니켈을 첨가하면 색깔이 좀더 진해지기도 합니다. -
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신동욱님의 답변
2010-01-09- 0
>TUNEL kit를 이용하여 apoptosis를 확인하고있습니다. (16um cryosection 조직) >조직을 염색할때 형광으로 관찰할때는 staining이 선명하게 잘되나, 그후에 HRP를 붙이고 DAB으로 발색하고 나면 발색이 거의 되지않아 detection이 안됩니다. >확인해본결과 DAB이나 HRP의 activity는 문제가 없고, TdT enzyme labeling후의 형광관찰도 문제가 없습니다. 다만 후에 HRP를 붙인후 DAB 발색하고 나면 detection이 안됩니다. (HRP, DAB반응시간을 늘려보아도...) DAB에 문제가 없다고 하는 데, DAB 사용이 좀 까다로우니 다시 한번 체크 바랍니다 (apoptosis kit file 참조) 시약에 전혀 문제가 없다면, sample에서 apoptosis 유도에 미흡한 것은 아닌가 싶습니다. 두가지 protocol을 살펴보시고, troubleshooting을 해보시길 바랍니다.