2010-01-09
org.kosen.entty.User@4d2880a0
조은애(eacho777)
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tlc로 분석하고 싶은데요~
lactone의 visualization하는 알고싶어요~
homoserine lactone이라는 quorum sensing molecule인데, develop한 후, 어떻게 visualization 해야하는지 궁금합니다..
- lactone
- detect
- tlc
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답변 3
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답변
이상후님의 답변
2010-01-10- 0
>tlc로 분석하고 싶은데요~ >lactone의 visualization하는 알고싶어요~ > >homoserine lactone이라는 quorum sensing molecule인데, develop한 후, 어떻게 visualization 해야하는지 궁금합니다. 일반적인 lactone류 TLC상에서의 visulation은 가장 보편적인 방법이 charring(oven에 넣고 120'C에서 태우는 것)입니다. 하지만 N-acyl homoserine lactone의 TLC상에서의 visualization법은 LacZ-based 분자생물학적 detection법이 있습니다. 즉, 특정 미생물이 생산하는 LacZ의 enzyme에 의한 발색반응을 이용한 visualization 하는 방법이 있습니다. 간략히 설명하면, N-acyl homoserine lactone을 TLC에 1-4 uL의 volumn으로 loading하는데 이때 사용하는 TLC종류는 C18 ODS TLC를 사용하고 전개용매로는 메탄올:물=6:4을 사용합니다. 용매 건조후에, indicator 균들을 사용하여 agar plate에 sample을 loading한 TLC를 놓고 배양시키게 되면 visualization이 됩니다. 그러기 위해서는 indicator 균을 배양시켜야 되는데 그 방법은 아래와 같습니다. 배양조건으로는 우선, indicator 균들을 사용하는데 대표적으로 많이 사용하는 균인, Agrobacterium tumefaciens NT1을 약 50 mL정도 2-3일 배양시킨후에, 1.12g의 녹인 agar와 60ug/ml의 5-bromo-4-chloro-3-indolyl b-D-galactopyranoside(X-Gal)이 들어있는 배지 100 mL에 첨가하고 45°C에서 유지시켜 주게 됩니다. 이후 배양액을 사전에 TLC plate의 표면에 speading시키고 Plexiglas jig에 그 plate를 놓습니다. Agar가 굳어지게 되면 그 plate를 밀폐된 플라스틱 용기속에 넣구 12-18시간 배양을 시키게 되면 blue spot으로 보이게 됩니다. 자세한 방법을 한정된 지면에서 설명하기엔 부족한거 같습니다. 그래서 밀접히 관련된 논문 2편을 첨부합니다. 실험부분을 읽어보시면 도움이 되실 것입니다. -
답변
안길홍님의 답변
2010-01-10- 0
참고자료에 설명되어 있습니다(국문자료). -
답변
조윤환님의 답변
2010-01-11- 0
http://jmm.sgmjournals.org/cgi/content/full/55/12/1751