2010-01-13
org.kosen.entty.User@65eb8503
천명주(polarismj)
- 7
HepG2 cell을 처음 키워보는데요..
cell을 분양받아 DMEM(+10%FBS)에서 키웠는데 cell이 붙지않았습니다..
혹시, HepG2 cell line이 HEPES의 영향을 많이 받는지 궁금합니다.
HepG2 키워보신 분들의 답변 부탁드립니다.ㅠ
- HepG2
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변!
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 7
-
답변
장성재님의 답변
2010-01-13- 2
분양받은 당시에 cell viability를 체크하셨나요. viability에 문제가 없다면,배지 조건을 검토하셔야 합니다. ATCC 홈페이지에서 추천하는 배지의 조건은 Eagle's Minimum Essential Medium (cat no. 30-2003, contain Earles Balanced Salt Solution, non-essential amino acids, 2 mM L-glutamine, 1 mM sodium pyruvate, and 1500 mg/L sodium bicarbonate)+ 10% FBS입니다. 세포의 형태는 epithelial이지만, 길게 늘어진 형태의 부착세포라기 보다는 삼각형, 사각형 또는 약간 둥근 편입니다만, 동그랗지는 않습니다. 제 경험으론 다른 암세포와 유사하게 비교적 성장이 잘 되었던 것으로 기억합니다. 대신 1/4 또는 1/6 비율 (약간 고농도 세포로 유지)로 희석하셔서 passge하는 편이 좋습니다. 다음의 웹사이트를 참고하세요. 사진도 링크되어 있습니다. http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default.aspx?ATCCNum=HB-8065&Template=cellBiology >HepG2 cell을 처음 키워보는데요.. > >cell을 분양받아 DMEM(+10%FBS)에서 키웠는데 cell이 붙지않았습니다.. > >혹시, HepG2 cell line이 HEPES의 영향을 많이 받는지 궁금합니다. > >HepG2 키워보신 분들의 답변 부탁드립니다.ㅠ > > > -
답변
신동욱님의 답변
2010-01-31- 2
>HepG2 cell을 처음 키워보는데요.. > >cell을 분양받아 DMEM(+10%FBS)에서 키웠는데 cell이 붙지않았습니다.. > >혹시, HepG2 cell line이 HEPES의 영향을 많이 받는지 궁금합니다. > >HepG2 키워보신 분들의 답변 부탁드립니다.ㅠ > 가장 다루기 쉬운 cell line의 하나인데, cell이 붙지 않았다는 것은 분양 받으신 HepG2세포 자체에 문제가 있어 보입니다. 새로 ATCC로부터 구입을 하거나, 다른 기간에 만들어진 new stock 을 푸시는 게 좋을 듯 싶습니다. -
답변
DELETED님의 답변
2010-01-13- 0
>HepG2 cell을 처음 키워보는데요.. > >cell을 분양받아 DMEM(+10%FBS)에서 키웠는데 cell이 붙지않았습니다.. > >혹시, HepG2 cell line이 HEPES의 영향을 많이 받는지 궁금합니다. > >HepG2 키워보신 분들의 답변 부탁드립니다.ㅠ > > > Re: 보통의 condition으로 키우시는것 같은데요..다시한번 해 보심이.. 그리고 안 붙었다고 버리지마시고, 걷어내고 culture 해보심이 좋을듯 합니다. 모양이 그래서 안 붙은것 처럼 보일 수도 있구요 density가 너무 낮을경우, HEPES의 영향은 별로 없는 듯 합니다.
DELETED(kimjeongki) 2010-01-13HEPES가 반드시 필요한것은 아닙니다. 일종의 pH 유지를 위한 buffer작용을 하는 것이구요..일반적으로는 넣지 않는 경우도 많이 있습니다.
-
답변
이상후님의 답변
2010-01-13- 0
>HepG2 cell을 처음 키워보는데요.. > >cell을 분양받아 DMEM(+10%FBS)에서 키웠는데 cell이 붙지않았습니다.. > >혹시, HepG2 cell line이 HEPES의 영향을 많이 받는지 궁금합니다. > >HepG2 키워보신 분들의 답변 부탁드립니다.ㅠ > HepG2 cell line에 대한 optimized protocol을 첨부하니 확인해 보시기 바랍니다. -
답변
안길홍님의 답변
2010-01-13- 0
HepG2 cell line에 대한 자료가 있어서 올립니다. 참고가 되기를. -
답변
김범수님의 답변
2010-01-13- 0
>HepG2 cell을 처음 키워보는데요.. > >cell을 분양받아 DMEM(+10%FBS)에서 키웠는데 cell이 붙지않았습니다.. > >혹시, HepG2 cell line이 HEPES의 영향을 많이 받는지 궁금합니다. > >HepG2 키워보신 분들의 답변 부탁드립니다.ㅠ > > > HepG2 cell 배양배지조성입니다. hep G2 2X MEM media 제조 Minimum esential medium 에 500 ml 의 ddw에 녹이고 + 1.5g sodium bicarbonate +1.0mM Sodium pyruvate (sigma Sodium pyruvate 5ml 첨가) 500ml hep G2 growth media 제조 2X MEM 250ml + 6mg/500ml penicillin + 8mg/500ml L gentamicin +FBS 50ml 나머지ddw 채워준다 (즉 0.1g/1ml 의penicillin 액을 60ul 넣고 0.1g/1ml gentamicin을 80ul 넣는다) 0.25% tripsin 0.53mM(0.02%) EDTA 제조 (20ml 제조) 2ml의 tripsin stock +20ul의 20% EDTA+PBS 17.98ml -
답변
강용석님의 답변
2010-01-13- 0
>HepG2 cell을 처음 키워보는데요.. > >cell을 분양받아 DMEM(+10%FBS)에서 키웠는데 cell이 붙지않았습니다.. > >혹시, HepG2 cell line이 HEPES의 영향을 많이 받는지 궁금합니다. > >HepG2 키워보신 분들의 답변 부탁드립니다.ㅠ > > > 아예 세포 부착이 안 되던가요? 아니면 스프레딩이 제대로 안 된 건지요? 모양 때문에 혼동되신 건 아닌지 해서... 저도 HepG2 cell line 처음 키울 때는 모양이 하도 동글동글하기만 해서 잘못 키우는 건줄 알았었는데요... 게다가 증식속도도 굉장히 늦구요, 하지만 ATCC의 세포주 정보에서 사진을 보니 모양이 많이 다르지 않더군요. 미디어는 그냥 일반적으로 많이 쓰는 DMEM(high glucose)+10%FBS 로 키웠습니다. 밀도를 좀 높게 해서 컬쳐를 하시면 좀 빠르게 dish 수를 늘릴 수 있습니다.