2010-01-21
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유현정(totoros)
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동물세포를 핵, 세포막, 미토콘드리아, 골지체, 소포체 등등 세포 구성성분별로 분리할 수 있는 방법 및 그 원리를 알고 싶습니다.
- 미토콘드리아
- 세포핵
- 세포막
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
이상후님의 답변
2010-01-21- 2
>동물세포를 핵, 세포막, 미토콘드리아, 골지체, 소포체 등등 세포 구성성분별로 분리할 수 있는 방법 및 그 원리를 알고 싶습니다. 세포내 구성물의 분리과정을 세포분획이라 하는데 먼저 등장액 배지에서 세포를 분쇄하여 균등질을 얻고, 이 균등질에서 소기관과 조각 단편을 분리할 수 있습니다. 균질화는 정해진 수용성 용액에서 세포를 분쇄하는 것입니다. 용액은 0~4℃정도의 온도에서 삼투압(보통 0.25mol?l?m-3 설탕)과 pH(약 7.0)을 일정하게 유지하며, 막을 안정하게 하는 Mg2+, 효소의 활성과 단백질을 보존하는 β-mercaptoethanol, 2.5 mmol?l?m-3을 포함합니다. 균등질은 원심분리에 의하여 분리되는데, 크기, 밀도, 그리고 모양이 다른 소기관들이나 단편조각을 원심 분리하였을 때, 이들은 각기 다른 속도로 침전하므로 이들의 분리가 가능합니다. Differential centrifugation은 조각 단편들의 혼합물을 크기에 따라 분리하는 것인데, 균등질은 원심력의 상대적 차이에 의해 여러 분획으로 분리되게 됩니다. 따라서 differential centrifugation의 단점은 항상 다른 조각에 의하여 오염된 침전물을 얻는다는 것입니다. Density-gradient centrifugation은 조각 단편들 사이의 작은 밀도 차이로 이들을 분리하는 것으로 세포균등질을 설탕의 밀도 구배 부위의 위에 놓고 원심 분리하는 것인데, 이 경우 튜브에서는 밀도의 구배가 형성되어 시료의 조각단편들은 자신의 밀도구배 내에서 층을 형성하게 됩니다. 소량의 세포는 원심분리법에 의해서도 잘 구분이 안갈 수 있기 때문에, 많은 세포들을 분쇄하여 같은 기관들끼리 모을 수가 있습니다. 즉, 세포소기관중에 무거운 것이 아래로 가게되면 상대적으로 가벼운 기관들이 위쪽으로 가게 됩니다. - 동물 : 핵 - 미토콘드리아 - 리보솜, 소포체 - 세포기질 - 식물 : 세포벽 - 핵 - 엽록체 - 미토콘드리아 - 리보솜,소포체 - 세포기질 많이 사용하는 세포분획용 원심분리기는 ultracentrufuge(초원심분리기)를 이용합니다. -
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안길홍님의 답변
2010-01-21- 0
>동물세포를 핵, 세포막, 미토콘드리아, 골지체, 소포체 등등 세포 구성성분별로 분리할 수 있는 방법 및 그 원리를 알고 싶습니다. 방법 및 그 윈리에 대한 참고자료 -
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신동욱님의 답변
2010-01-31- 0
>동물세포를 핵, 세포막, 미토콘드리아, 골지체, 소포체 등등 세포 구성성분별로 분리할 수 있는 방법 및 그 원리를 알고 싶습니다. 보통 ultracentrufuge를 사용합니다. 다음 protocol을 확인해보세용 -
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조수호님의 답변
2018-02-05- 0
동물세포를 분리하기 위해서는 원심분리기를 이용하여 속도와 시간을 점차 늘려가면서 상등액을 분리하시면 됩니다. 이전에 동물세포는 얼음을 이용한 저온 상태에서 균질기로 파쇄해주시면 됩니다.