2010-01-29
org.kosen.entty.User@6cf5ccfe
이현정(endeavor821)
- 3
실험하다 계속 해결책을 찾지못해 글 올립니다.
혹시 같은 경험을 하셨거나 해결 방안을아시는 분은 조언 부탁 드립니다.
제가 cell doubling time을 계산하려고 cell stock을 thawing 하여 80-90% 자랐을때
cell을 떼어내어 35mm dish에 5x10^4 cell을 seeding 했는데요
cell 종류는 7가지입니다.
7가지 종류의 셀을 같은 방법으로 seeding을 해서 다음 날 보면
7가지 cell에 이상한 같은 모양을 지닌 cell이 존재하더라구요.
이상한 셀이 자라고 있지 않으면 cell이 붙지 않아 전부 동동 떠 다닙니다.
cell 준비할때 하나씩 떼서 하나씩 seeding 한거라 셀이 섞일 일은 없었어요.
뭐가 문제일까요?
제가 처음에 핸들링에 있어 문제가 있나 해서 다음번에 할땐 정말 조심조심해서 했는데도
똑같은 현상이 생기고 dish에 문제가 있나 해서 6well로 바꿨는데도 그렇습니다.
근데 이해가 안가는건 위 방법으로 cell을 seeding하고 남은 셀을 T75나 10cm dish에
분주했는데 그 셀들은 다 멀쩡한데 꼭 35mm dish에 seeding 한 것들만 그러네요.
제가 실험을 잘 못하는 건지... dish에 문제가 있는건지....
T75나 10cm dish에 자라는 셀들은 멀쩡한 걸로 봐서 배지 오염은 아닌 것 같은데
어디에 문제가 있어 이런일이 자꾸 일어나는지 모르겠어요.
문제점을 모르니 해결책을 못 찾고 있습니다.
혹시 방안책을 아시는 분은 조언 부탁 드려요.
셀이 이 모양이니 실험 진행이 전혀 안되고 있어 답답합니다. 아흑~
- cell seeding
- cell contamination
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 3
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답변
이상후님의 답변
2010-01-29- 2
>실험하다 계속 해결책을 찾지못해 글 올립니다. > >혹시 같은 경험을 하셨거나 해결 방안을아시는 분은 조언 부탁 드립니다. > >제가 cell doubling time을 계산하려고 cell stock을 thawing 하여 80-90% 자랐을때 > >cell을 떼어내어 35mm dish에 5x10^4 cell을 seeding 했는데요 > >cell 종류는 7가지입니다. > >7가지 종류의 셀을 같은 방법으로 seeding을 해서 다음 날 보면 > >7가지 cell에 이상한 같은 모양을 지닌 cell이 존재하더라구요. > >이상한 셀이 자라고 있지 않으면 cell이 붙지 않아 전부 동동 떠 다닙니다. > >cell 준비할때 하나씩 떼서 하나씩 seeding 한거라 셀이 섞일 일은 없었어요. > >뭐가 문제일까요? > >제가 처음에 핸들링에 있어 문제가 있나 해서 다음번에 할땐 정말 조심조심해서 했는데도 > >똑같은 현상이 생기고 dish에 문제가 있나 해서 6well로 바꿨는데도 그렇습니다. > >근데 이해가 안가는건 위 방법으로 cell을 seeding하고 남은 셀을 T75나 10cm dish에 > >분주했는데 그 셀들은 다 멀쩡한데 꼭 35mm dish에 seeding 한 것들만 그러네요. > >제가 실험을 잘 못하는 건지... dish에 문제가 있는건지.... > >T75나 10cm dish에 자라는 셀들은 멀쩡한 걸로 봐서 배지 오염은 아닌 것 같은데 > >어디에 문제가 있어 이런일이 자꾸 일어나는지 모르겠어요. > >문제점을 모르니 해결책을 못 찾고 있습니다. > >혹시 방안책을 아시는 분은 조언 부탁 드려요. > >셀이 이 모양이니 실험 진행이 전혀 안되고 있어 답답합니다. 아흑~ > Adherent cells(부착성 세포)의 경우는 약 2ml media에 3~6 X 10(5) cells를 보통seeding하는데, cell line에 따라 well을 어떤 well을 사용하는가에 따라서 cell seeding의 농도가 달라질 수 있습니다. 예를 들어서, NIH3T3세포의 경우는 좀더 낮은 농도로 seeding하도록 권장하고 있습니다. Seeding양이 어느정도 되는지요? 좀 낮은 cell양을 사용해서 seeding해 보시길 바랍니다.. -
답변
신동욱님의 답변
2010-01-31- 2
>실험하다 계속 해결책을 찾지못해 글 올립니다. >혹시 같은 경험을 하셨거나 해결 방안을아시는 분은 조언 부탁 드립니다. >제가 cell doubling time을 계산하려고 cell stock을 thawing 하여 80-90% 자랐을때 >cell을 떼어내어 35mm dish에 5x10^4 cell을 seeding 했는데요 >cell 종류는 7가지입니다. >7가지 종류의 셀을 같은 방법으로 seeding을 해서 다음 날 보면 >7가지 cell에 이상한 같은 모양을 지닌 cell이 존재하더라구요. >이상한 셀이 자라고 있지 않으면 cell이 붙지 않아 전부 동동 떠 다닙니다. >cell 준비할때 하나씩 떼서 하나씩 seeding 한거라 셀이 섞일 일은 없었어요. >뭐가 문제일까요? >제가 처음에 핸들링에 있어 문제가 있나 해서 다음번에 할땐 정말 조심조심해서 했는데도 >똑같은 현상이 생기고 dish에 문제가 있나 해서 6well로 바꿨는데도 그렇습니다. >근데 이해가 안가는건 위 방법으로 cell을 seeding하고 남은 셀을 T75나 10cm dish에 >분주했는데 그 셀들은 다 멀쩡한데 꼭 35mm dish에 seeding 한 것들만 그러네요. >제가 실험을 잘 못하는 건지... dish에 문제가 있는건지.... >T75나 10cm dish에 자라는 셀들은 멀쩡한 걸로 봐서 배지 오염은 아닌 것 같은데 >어디에 문제가 있어 이런일이 자꾸 일어나는지 모르겠어요. >문제점을 모르니 해결책을 못 찾고 있습니다. >혹시 방안책을 아시는 분은 조언 부탁 드려요. >셀이 이 모양이니 실험 진행이 전혀 안되고 있어 답답합니다. 아흑~ 독특한 현상이군용.. T75나 10cm dish에 자라는 셀들은 멀쩡한 걸로 봐서---> 라고 하시니, 배지 오염이나 세포들이 contamination 된 것 같지는 않아 보입니다. 그래도, 35mm dish, 6 well dish에서 자꾸 저런 현상이 나타난다고 하시니깐, 아예 세포를 stock으로부터 다시 꺼내시구요... 35mm dish, 6 well dish을 다루실 때에는 알코올램프로 flame하면서 진행을 하시길 바랍니다. 배지 또한 새로 만들어서 시작하시길 바랍니다
이현정(endeavor821) 2010-02-02이 문제 해결 됐어요.. cell stock 새로 꺼내서 thawing 해도 똑같은 현상이 일어나서 아예 culture dish를 35mm에서 60mm로 바꿨더니 괜찮더라구요. 그래서 지금 실험 진행 중입니다^^ 아무튼 두분다 답변 감사하고요.. 실험할때 더욱 주의를 기울여야 겠어요~~
그럼 즐거운 한 주 보내세요~~ -
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전정용님의 답변
2010-02-05- 0
>실험하다 계속 해결책을 찾지못해 글 올립니다. > >혹시 같은 경험을 하셨거나 해결 방안을아시는 분은 조언 부탁 드립니다. > >제가 cell doubling time을 계산하려고 cell stock을 thawing 하여 80-90% 자랐을때 > >cell을 떼어내어 35mm dish에 5x10^4 cell을 seeding 했는데요 > >cell 종류는 7가지입니다. > >7가지 종류의 셀을 같은 방법으로 seeding을 해서 다음 날 보면 > >7가지 cell에 이상한 같은 모양을 지닌 cell이 존재하더라구요. > >이상한 셀이 자라고 있지 않으면 cell이 붙지 않아 전부 동동 떠 다닙니다. > >cell 준비할때 하나씩 떼서 하나씩 seeding 한거라 셀이 섞일 일은 없었어요. > >뭐가 문제일까요? > >제가 처음에 핸들링에 있어 문제가 있나 해서 다음번에 할땐 정말 조심조심해서 했는데도 > >똑같은 현상이 생기고 dish에 문제가 있나 해서 6well로 바꿨는데도 그렇습니다. > >근데 이해가 안가는건 위 방법으로 cell을 seeding하고 남은 셀을 T75나 10cm dish에 > >분주했는데 그 셀들은 다 멀쩡한데 꼭 35mm dish에 seeding 한 것들만 그러네요. > >제가 실험을 잘 못하는 건지... dish에 문제가 있는건지.... > >T75나 10cm dish에 자라는 셀들은 멀쩡한 걸로 봐서 배지 오염은 아닌 것 같은데 > >어디에 문제가 있어 이런일이 자꾸 일어나는지 모르겠어요. > >문제점을 모르니 해결책을 못 찾고 있습니다. > >혹시 방안책을 아시는 분은 조언 부탁 드려요. > >셀이 이 모양이니 실험 진행이 전혀 안되고 있어 답답합니다. 아흑~ > 35mm dish 상태확인도 해보시는게 어떨런지요. 드물게 부착성 세포용이 아닌 일반 dish로 실험하는 경우가 간혹 있거든요.