2010-03-03
org.kosen.entty.User@53821060
이유진(crony0213)
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세포를 용해 시켜 단백질 추출 후 웨스턴 하려고 합니다
lysis buffer를 10 mM PIPES buffer (pH 6.5)에 10 mM EDTA와 1 mM PMSF, Protease inhibitor cocktail을 넣어서 만들어야 하는데
1. 일단 10 mM PIPES, 10 mM EDTA, 1 mM PMSF를 만들어서 1:1:1의 볼륨으로 섞어야 하는지? 아니면 다른 볼륨으로 섞어야 하는지?? (EDTA는 pH가 높아야 물에 용해 되므로)
2. 아니면 DW에 다가 모든 파우더를 넣고 녹이면 되는지??
궁금합니다
- lysis buffer
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답변 1
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답변
이호진님의 답변
2010-03-08- 3
보통은 10 mM PIPES buffer (pH 6.5)에 10 mM EDTA와 1 mM PMSF이 들어 있는 1리터 용액을 만들어 이것을 stock solution으로 사용하시면 됩니다. 즉 1L 비이터에 PIPES가 10 mM이 되도록 무게를 계산해서 넣은 다음 물을 붓고 (pH를 맞추는 것을 먼저 해야 합니다). 10mM EDTA나 넣으셔야 하는지 조금은 이해가 안되지만, 저희는 0.2 M EDAT (pH7.0)을 만들어 넣고 다른 용액을 만들 때 이것을 사용합니다. EDTA는 pH가 낮을 때는 녹지 않기 때문에 KOH를 넣어서 pH를 조정하셔야 합니다. 200 mM X abcL = 10 mM x 1L. abc의 부피를 넣은 후에 1L까지 채워줍니다. Protease inhibitor cocktail의 경우 저희는 알약처럼 생긴 것을 사용합니다. lysis buffer 40ml에 한 알 정도 넣어서 사용하기도 하지만, 하루 안에 실험이 끝나면 저는 안넣기도 합니다. 그리고 이 녀석이 몸값이 좀 비싼 걸로 알고 있습니다. >세포를 용해 시켜 단백질 추출 후 웨스턴 하려고 합니다 > >lysis buffer를 10 mM PIPES buffer (pH 6.5)에 10 mM EDTA와 1 mM PMSF, Protease inhibitor cocktail을 넣어서 만들어야 하는데 > >1. 일단 10 mM PIPES, 10 mM EDTA, 1 mM PMSF를 만들어서 1:1:1의 볼륨으로 섞어야 하는지? 아니면 다른 볼륨으로 섞어야 하는지?? (EDTA는 pH가 높아야 물에 용해 되므로) > >2. 아니면 DW에 다가 모든 파우더를 넣고 녹이면 되는지?? > >궁금합니다