2010-03-18
org.kosen.entty.User@363eab53
조도연(ds1bll)
- 2
HPLC로 단백질 분석을 하고 있는데
요즘 들어서 autosampler 부분에서 계속 문제를 일으키고 있어서 질문 드립니다.
1. autosampler flush시에 현재 100% MeOH를 사용하고 있는데 단백질 분석시에 또 다른 용매가 있는지 궁금 합니다.
2. autosampler 사용시 주입되는 시료량이 흔들리고 있는데 보정할 수 있는 방법에 관해 알려주세요^^
- HPLC
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답변 2
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답변
이상후님의 답변
2010-03-18- 2
>HPLC로 단백질 분석을 하고 있는데 > >요즘 들어서 autosampler 부분에서 계속 문제를 일으키고 있어서 질문 드립니다. > >1. autosampler flush시에 현재 100% MeOH를 사용하고 있는데 단백질 분석시에 또 다른 용매가 있는지 궁금 합니다. > >2. autosampler 사용시 주입되는 시료량이 흔들리고 있는데 보정할 수 있는 방법에 관해 알려주세요^^ 1. 세포내에 존재하는 단백질을 분석하는 것이라면 우선 isopropyl alcohol로 세척한 후에, 메탄올, 물로 충분히 세척한 후에 사용해 보세요. 2. 시료 주입량이 흔들리게 되면 시료를 주입하는 needle을 고정시키는 sealing tip을 교환해야 될 거 같군요..엔지니어에게 문의해 보세요.. -
답변
신은혜님의 답변
2010-03-25- 2
>HPLC로 단백질 분석을 하고 있는데 > >요즘 들어서 autosampler 부분에서 계속 문제를 일으키고 있어서 질문 드립니다. > >1. autosampler flush시에 현재 100% MeOH를 사용하고 있는데 단백질 분석시에 또 다른 용매가 있는지 궁금 합니다. > >2. autosampler 사용시 주입되는 시료량이 흔들리고 있는데 보정할 수 있는 방법에 관해 알려주세요^^ 1. Syringe 혹은 column line washing에 Isopropyl acid (IPA)를 많이 사용합니다. 하지만 flush mode로 세척시 IPA를 사용하게 되면 IPA 자체의 분자량이 크기 때문에 syringe에 압력이 가해져 오히려 역효과가 나는 경우가 있습니다. 웬만하면 flush 용매는 methanol, acetonitrile로 하시거나 10% IPA 정도로 사용하세요. 이렇게는 wshing이 잘 되지 않는다면 flush 시 washing 용매의 양을 줄여서 IPA를 사용하세요. 혹 flush mode외에 다른 washing mode가 있다면(ex. vial washing)그 방법을 사용하세요. 2. 혹시 injection 할 때에 "끼익~끼익~" 하는 소리가 크게 들리지는 않으신지요. 단백질등의 물질을 많이 injection하다 보면 syringe가 막히는 경우가 많습니다 (저또한 이런이유로 고생많이 했습니다ㅠ.ㅠ). 이렇게 막히면 처음엔 주입량이 일정치 않다가 나중에는 아예 sampler만 작동할 뿐 결과적으론 아무 물질도 들어가지 않게 나오더군요. 이러한 경우 syringe needle을 빼셔서 sonication을 통해 washing을 해주셔야 합니다. Sonic으로도 막힌 부분이 뚫리지 않는다면 아주 미량의 acidic 성분이 needle을 통과하게 하시면 뚫리는 경우도 있습니다. 하지만 여분의 needle이 있다면 교체하는 방법이 제일 좋기는 합니다. 막히는 현상이 반복된다면 시료를 꼭 filtration 하셔서 막히지 않게 해주세요.