2010-03-23
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이미진(myjc7)
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LC/MS 분석시 buffer 사용시, trifluoroacetic acid (TFA) 도 사용가능한가요?
문헌에는 0.05% 사용하게 되어있는데 UPLC 조건이라서 사용해도 될런지,,
답변부탁드리겠습니다.
- LC/MS
- trifluoroacetic acid (TFA)
- buffer
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
이상후님의 답변
2010-03-24- 5
>LC/MS 분석시 buffer 사용시, trifluoroacetic acid (TFA) 도 사용가능한가요? > >문헌에는 0.05% 사용하게 되어있는데 UPLC 조건이라서 사용해도 될런지,, > >답변부탁드리겠습니다. > TFA(trifluoroacetic acid)는 단백질, 펩타이드 같은 역상 분리에 일반적인 ion pairing reagent 입니다. TFA의 주요 역할은 이동상에서 좋은 피크모양을 얻도록 하는 것인데, TFA는 피크의 broading과 tailing을 감소시킵니다. broading과 tailing은 주로 펩타이드의 다양한 극성, 이온성, 소수성 부분이 silica 표면의 친수성 결합표면이나 잔여 극성 그룹과 상호작용하여 발생되게 되는데, TFA는 단백질, 펩타이드의 극성 그룹과 쌍을 이룸으로써 이러한 polar interaction이 일어나지 않도록 이 부분을 보호하여, 소수성 역상 표면으로 접근할 수 있도록 하는 역할을 하게 되는 것입니다. 결과적으로 broading과 tailing을 감소시킵니다. TFA는 흡착제의 결합되지 않은 극성부분을 가려줌으로써 역상 흡착제를 보호해주며, 컬럼과 폴리펩타이드 양쪽에서 상호작용 하는 것으로 입증되었습니다. 또한 TFA는 휘발성이 강하여 pep fraction에서 쉽게 제거되므로, 다른 modifier보다 자주 사용되고 있습니다. UV 흡수 스펙트럼은 200nm이하로 낮은 파장에서 펩타이드 감지의 방해를 최소화 하며, TFA의 농도를 변화시켜 분리를 할 수 있습니다. TFA는 흔히 0.1% 농도로 이동상에 첨가되며, 이 농도에서 대부분 좋은 결과를 얻을 수 있습니다. 이보다 훨씬 낮은 농도에서는 눈에 보일 정도의 broading과 tailing이 일어나게 되는데 이것은 큰 문제는 되지 않습니다. 참고하세요. -
답변
조윤환님의 답변
2010-03-24- 2
가능합니다. HPLC와 UPLC의 차이는 작동압력과 컬럼의 입자크기 정도 밖에 없습니다.