2010-04-12
org.kosen.entty.User@ec244b3
김정환(mark1130)
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마우스 RAW264.7 cell에 물질 처리를 하고 나서 세포내 유전자의 발현 정도를 알아보기 위한 실험을 하기 위해서 세포로 부터 total RNA를 추출할려고 합니다.
그런데 암것도 처리하지 않은 cell(negative control이 되겠죠)과 물질을 농도별로 처리한 세포의 경우 TRIzol을 이용하여 문제없이 잘 추출하여 cDNA 만들기 까지문제가 없었습니다.
그런데 LPS를 처리한 세포(positive control이 되겠죠)의 경우에만 반복적으로
RNA 추출이 안되네요
control 실험이 중요한데 실험군에서는 잘 나오지만 대조군에서 RNA자체가 뽑히지 않어
실험 진행이 안됩니다.
혹시 노하우를 가지고 계신 고수님들의 지적 부탁드립니다~
- RAW264.7
- Total RNA
- RNA isolation
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 1
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답변
장성재님의 답변
2010-04-28- 0
실험 조건을 꼼꼼히 챙기실 필요가 있습니다. RNA의 분리가 안된다는 말씀은 그 원인을 여러가지를 들 수 있는데, RNase에 의한 분해일지, 실험군 세포가 독성에 의해 사멸하여 세포수가 줄었기 때문일 수도 있고 다양합니다. 실험 조건을 하나하나 집어보시길 바랍니다. 세포수, LPS의 처리농도, 처리 몇시간 경과 후 추출과정을 하였는지 등을 알려주시길 바랍니다. >마우스 RAW264.7 cell에 물질 처리를 하고 나서 세포내 유전자의 발현 정도를 알아보기 위한 실험을 하기 위해서 세포로 부터 total RNA를 추출할려고 합니다. >그런데 암것도 처리하지 않은 cell(negative control이 되겠죠)과 물질을 농도별로 처리한 세포의 경우 TRIzol을 이용하여 문제없이 잘 추출하여 cDNA 만들기 까지문제가 없었습니다. >그런데 LPS를 처리한 세포(positive control이 되겠죠)의 경우에만 반복적으로 >RNA 추출이 안되네요 >control 실험이 중요한데 실험군에서는 잘 나오지만 대조군에서 RNA자체가 뽑히지 않어 >실험 진행이 안됩니다. >혹시 노하우를 가지고 계신 고수님들의 지적 부탁드립니다~ >