2010-05-24
org.kosen.entty.User@3bfcd006
노정란(ggoljji1)
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마우스로부터 splenocyte를 분리하여 adoptive transfer를 하려고합니다.
궁금한 점은,
1. splenocyte를 분리 할 때 종종 lysis를 DW로 하던데 괜찮은 것인지요?
2. 혹시 transfer 해 보신 분이 계시다면 이것을 하루 정도 culture 후에 해야하는지 아니면 분리한 날 바로 해야하는지 궁금합니다.
- splenocyte
- lysis
- adoptive transfer
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답변 2
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답변
김동현님의 답변
2010-05-24- 0
1. DW로 하더라도 무방합니다. (RBC lysis의 원리는 저장액에서 삼투압 차이에 의해 RBC의 용혈이 일어나는 것이며, 잠깐동안 DW나 그외의 RBC lysis buffer를 사용하는 것은 WBC에는 별 영향을 미치지 않습니다) 2. 분리한 날 바로 하는 것이 일반적이지만, 경우에 따라 in vitro에서 자극을 주어 활성화시키거나 원하는 세포만 분리하여 transfer하기도 합니다. 하루 정도 culture 후 transfer해도 무방할 것 같습니다. >마우스로부터 splenocyte를 분리하여 adoptive transfer를 하려고합니다. >궁금한 점은, > >1. splenocyte를 분리 할 때 종종 lysis를 DW로 하던데 괜찮은 것인지요? >2. 혹시 transfer 해 보신 분이 계시다면 이것을 하루 정도 culture 후에 해야하는지 아니면 분리한 날 바로 해야하는지 궁금합니다. > -
답변
김은경님의 답변
2010-05-24- 0
>마우스로부터 splenocyte를 분리하여 adoptive transfer를 하려고합니다. >궁금한 점은, > >1. splenocyte를 분리 할 때 종종 lysis를 DW로 하던데 괜찮은 것인지요? >2. 혹시 transfer 해 보신 분이 계시다면 이것을 하루 정도 culture 후에 해야하는지 아니면 분리한 날 바로 해야하는지 궁금합니다. > 저는 RBC lysis 버퍼를 사용하지 않고 Lympoprep이라는 버퍼를 넣어서 centrifuge를 통해서 RBC를 제거했습니다. lympoprep을 쓰면 제일 밑에 RBC층 그 위에 cell층, 그위에 serum층이 생기거든요. 그래서 serum과 cell만 다른 tube에 옮겨서 실험했구요. 가능한 PBS로 워싱을 했구요.. (transfer는 안해봐서 모르겠네요..죄송..해요...)