2010-05-25
org.kosen.entty.User@4f522549
김수영(ponicon)
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His-protein A
mbp-protein B
를 각각 purify 하여 mbp로 pull down assay를 진행중입니다.
amylose resin에 mbp-b를 over night하여 binding 시킨 뒤
his-A 를 binding
buffer 로 wash 3회
elution (+100mM maltose)로 받고있습니다
버터는 500mM NaCl 쓰고 있고요.
웨스턴해서 결과를 보면 (+)control에서 MBP-B 는 나오는데 His-A는 나오지 않네요.
(+)control은 binding이 이미 알려진 단백질을 이용해 수행하였구요 ...
제 실험에서 잘못된 부분이 어딜까요?
고수님들의 조언 부탁드립니다..
제생각에는 버퍼 문제가 아닐까 싶은데 다들 어떤 버퍼 쓰시나요 ? ㅠㅠ
- mbp pull down
- pull down assay
- column buffer
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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