2010-07-15
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채유나(moiedna)
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안녕하세요~~
제가 처음 real-time PCR을 하려고 하는데, 모르는 부분이 있어 질문드립니다..
많은 도움 주시면 감사하겠습니다^^;;
제가 실험을 하고자 하는 내용은 조직에서 total RNA를 분리하여 cDNA 합성 후, mitochondria에 존재하는 유전자에 대해 분석을 하고자 하는 것입니다.
cDNA를 template로 하여 real-time PCR을 하는 경우,
standard curve를 어떻게 만드는지를 잘 모르겠습니다.
여러 관련된 자료를 보면 cDNA를 serial dilution 하라고 하는데;;;;;
보통 어느정도의 total RNA를 사용하여 cDNA를 만들고,
real-time PCR을 할 때 사용되는 cDNA volume은 어느정도이며,
standard curve를 만들 때는 만들어진 cDNA를 dilution하는 것인지..
아니면 total RNA 양을 달리하여 cDNA를 만들어 PCR을 하게 되는 것인지 잘 모르겠습니다.
보정은 18s rRNA로 하고자 합니다.
각각에 경우에 대해서 standcruve 만드는 법에 대해 설명해 주시면 정말 감사하겠습니다^^;;
- real-time PCR
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 1
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답변
장성재님의 답변
2010-07-15- 0
원하시는 것이 유전자의 copy number를 측정하는 것 (absolute quantification)인지 상대적인 것 (relative quantification)인지에 따라서 차이가 있을 수 있습니다. real tiem RT-PCR의 일반적으로 내용은 아래의 사이트를 참고하세요. http://www.ambion.com/techlib/basics/rtpcr/index.html#8 절대 정량법의 경우 첨부한 자료를 참조하시길 바랍니다. >안녕하세요~~ > >제가 처음 real-time PCR을 하려고 하는데, 모르는 부분이 있어 질문드립니다.. >많은 도움 주시면 감사하겠습니다^^;; >제가 실험을 하고자 하는 내용은 조직에서 total RNA를 분리하여 cDNA 합성 후, mitochondria에 존재하는 유전자에 대해 분석을 하고자 하는 것입니다. >cDNA를 template로 하여 real-time PCR을 하는 경우, >standard curve를 어떻게 만드는지를 잘 모르겠습니다. >여러 관련된 자료를 보면 cDNA를 serial dilution 하라고 하는데;;;;; >보통 어느정도의 total RNA를 사용하여 cDNA를 만들고, >real-time PCR을 할 때 사용되는 cDNA volume은 어느정도이며, >standard curve를 만들 때는 만들어진 cDNA를 dilution하는 것인지.. >아니면 total RNA 양을 달리하여 cDNA를 만들어 PCR을 하게 되는 것인지 잘 모르겠습니다. >보정은 18s rRNA로 하고자 합니다. >각각에 경우에 대해서 standcruve 만드는 법에 대해 설명해 주시면 정말 감사하겠습니다^^;; >