2010-08-12
org.kosen.entty.User@246809b
장현희(petfrog)
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사람의 blood에서 MNC를 분리하여 EPC의 migration을 보려고 합니다.
그런데 blood에서 MNC를 분리하고 그것을 counting하여 바로 matrigel에 seedig을 하는지 아니면 7일 정도 배양 후, 그 cell을 떼어 내어 counting한 후, matrigel에 seeding 하는 지 궁금합니다.
migration 과 invasion cell seeding시에도 분리 후, 바로 하는지 아니면
culture 후, 다시 counting 하여 welldp seeding 하는지요
- EPC
- migration
- cell 개수
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
장성재님의 답변
2010-08-12- 0
우선 MNC를 분리한 후, collagen 또는 gelatin-coated plate에 seeding 후 선별배지에 3-7일간 배양하면서 비부착성 세포를 제거합니다. 아시다시피 EPC만을 분리하는 것이지요. 이때 분리하신 EPC의 특성 검사를 반드시 하셔야만 합니다. 언급하신 matrigel이란 것은 제가 알기로는 EPC 또는 endothelial cell의 tube formation에 사용하는 것데, 이것에 배양을 하실 생각이신가요? 그리고, 아시다시피 cell migration assay에 사용하는 배양용기는 따로 있습니다. 막이 장착된 transwell plate라고.... 실험이 처음이시라면 주위의 경험이 있는 분이나 관련 논문을 검색하신 후 참고하셔서 실험에 임하시는 편이 좋을 듯 싶습니다. 정확한 실험의 디자인, 목적 등을 알지 못하기 때문에 더 이상의 도움을 드리지 못하겠네요. >사람의 blood에서 MNC를 분리하여 EPC의 migration을 보려고 합니다. > >그런데 blood에서 MNC를 분리하고 그것을 counting하여 바로 matrigel에 seedig을 하는지 아니면 7일 정도 배양 후, 그 cell을 떼어 내어 counting한 후, matrigel에 seeding 하는 지 궁금합니다. >migration 과 invasion cell seeding시에도 분리 후, 바로 하는지 아니면 >culture 후, 다시 counting 하여 welldp seeding 하는지요 -
답변
장현희님의 답변
2010-08-12- 0
>사람의 blood에서 MNC를 분리하여 EPC의 migration을 보려고 합니다. > >그런데 blood에서 MNC를 분리하고 그것을 counting하여 바로 matrigel에 seedig을 하는지 아니면 7일 정도 배양 후, 그 cell을 떼어 내어 counting한 후, matrigel에 seeding 하는 지 궁금합니다. >migration 과 invasion cell seeding시에도 분리 후, 바로 하는지 아니면 >culture 후, 다시 counting 하여 welldp seeding 하는지요 위 선생님 맒씀은 MNC 분리 후, 선별 배지에 7일 정도 배양 후, EPC 특성 검사를 하고 cell counting 후 tube formation , migration을 하면 된다는 말씀이시죠?? tube formation은 matrigel을 굳히고 EPC를 일정한 수 만큼 넣어 주고 24h~48h관찰 하는 것으로 알고 있는 데요.. 아닌가요?? migration은 transwell plate에 시행할 예정입니다.
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답변
이재옥님의 답변
2010-08-21- 0
Wound healing assay는 일반 well plate에서도 가능합니다. 아래 literature를 참고하시고 좋은 결과 내십시요. Staton C.A., Stribbling S.M., Tazzyman S., Hughes R., Brown N.J. and Lewis C.E. (2004) Current methods for assaying angiogenesis in vitro and in vivo. Int. J. Exp. Pathol., 85, 233-248. >사람의 blood에서 MNC를 분리하여 EPC의 migration을 보려고 합니다. > >그런데 blood에서 MNC를 분리하고 그것을 counting하여 바로 matrigel에 seedig을 하는지 아니면 7일 정도 배양 후, 그 cell을 떼어 내어 counting한 후, matrigel에 seeding 하는 지 궁금합니다. >migration 과 invasion cell seeding시에도 분리 후, 바로 하는지 아니면 >culture 후, 다시 counting 하여 welldp seeding 하는지요
migration을 할때는 trans well plate에 시행 할 것이구요...
선생님 말대로 라면 tube formation이 되었든 migration assay 하던지...
MNC 분리 후, 선별배지에 배양 하여 EPC 특성 검사를 한 후, 시행 하라는 말씀이시지요??