2010-10-05
org.kosen.entty.User@297b2239
박석황(aspirin1107)
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실험실에서 배워가는 초짜 석사생입니다.
다름이 아니라~ cell을 lysis후 HA beads로 IP하는 작업을 진행하고 있습니다.
근데~ RIPA lysis buffer로 lysis를 하였을때는 lysate에서 detection이 안되고,
IP band에서는 나오는 현상~ ㅜㅡ
또한 SDS lysis buffer로 lysis하면 lysate에서 detection이 됩니다.
그래서 SDS lysis후 lysate를 희석해서 IP를 하고 있는데요..
왜 이런현상이 이러나지요?? 다른 선배들에게 물어봐도.. 신기하다고만 하네요 ㅜㅡ
cell의 문제일까요??
참고로 buffer를 여러번 교체해 보았습니다.(다른분들꺼로 사용)
RIPA: 50mM Tris-Hcl, 150mM Nacl, 1% NP-40, 1%sodium deoxycholate, 0.1% SDS
SDS: 2% SDS, 62.5mM Tris-cl
- lysis
- ripa
- SDS
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
이영진님의 답변
2010-10-06- 0
사용하시는 antibody의 datasheet를 다시한번 살펴보세요. 각 lysis buffer마다 solubility가 다르기 때문에 이것이 antibody의 특정 epitope인식에 영향을 줍니다.실제 어떤 antibody는 native상태의 protein만 인식하는 경우도 있고, ionic (SDS) 혹은 non-ionic (NP-40,...) detergent의 농도와 조합에 민감하게 반응하는 antibody 또한 존재합니다. 그러므로, 연구자께서 사용하시는 antibody의 성격을 다시한번 확인하시고 사용하시면 될 듯 합니다. 좋은 연구결과 있길 바랍니다. >실험실에서 배워가는 초짜 석사생입니다. > >다름이 아니라~ cell을 lysis후 HA beads로 IP하는 작업을 진행하고 있습니다. > >근데~ RIPA lysis buffer로 lysis를 하였을때는 lysate에서 detection이 안되고, > >IP band에서는 나오는 현상~ ㅜㅡ > >또한 SDS lysis buffer로 lysis하면 lysate에서 detection이 됩니다. > >그래서 SDS lysis후 lysate를 희석해서 IP를 하고 있는데요.. > >왜 이런현상이 이러나지요?? 다른 선배들에게 물어봐도.. 신기하다고만 하네요 ㅜㅡ > >cell의 문제일까요?? > >참고로 buffer를 여러번 교체해 보았습니다.(다른분들꺼로 사용) >RIPA: 50mM Tris-Hcl, 150mM Nacl, 1% NP-40, 1%sodium deoxycholate, 0.1% SDS >SDS: 2% SDS, 62.5mM Tris-cl