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SA-beta gal staining

2010-10-18 org.kosen.entty.User@15d4fe49 김수영(ponicon)
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안녕하세요. SA-beta gal staining에 대해 공부하던 중 궁금한 것이 있어 질문드립니다. staining시에 넣는 여러가지 시약들의 역할에 대해서 구체적으로 알고싶어 여기저기 뒤져보았는데 찾을 수가 없어서요. 일단 제가 이해한 것은 cellular senescence시 GLB1이라는 gene이 overexpression되고 이에 의해 만들어지는 GLB1 protein이 beta-galactosidase로써 기질인 X-gal을 분해한다.. 입니다. staining의 protocol을 보면 6well plate에서 1. PBS로 2-3회 wasing 2. 3% formaldehyde RT 10min incubation 3. 2를 PBS로 다시 washing 4. stining solution 넣고 Over night(12-16hr) 인데 staining solution조성을 보면 1mg/ml X-gal 5mM potassium ferricyanide 5mM potassium ferrocyanide 2mM MgCl2 150mM NaCl pH6.0 Citric acid-soium phosphate 입니다. X-gal은 기질로서 beta-galactosidase에 의해 분해되어 blue로 발색을 하고, 이때 senescence emzyme specific 하게 반응시키기 위해 Citric acid-soium phosphate 로 pH조절을위해 넣어주는 것으로 이해했습니다. 맞나요? 나머지는 .. 특히 5mM potassium ferricyanide, 5mM potassium ferrocyanide는 왜 첨가하는지 궁금합니다.. ㅜㅜ
  • SA-beta gal staining
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답변 1
  • 답변

    장성재님의 답변

    2010-10-18
    • 0
    potassium ferricyanide와 potassium ferrocyanide는 beta gal에 의해 X-gal이 분해된 후에 생성된 colorless indoxyl monomer의 산화 반응에 의한 blue colored precipitates의 생성을 돕는 redox potential의 형성을 위해서 첨가되는 것입니다. 아래의 웹사이트 문서를 참고하세요. http://genepath.med.harvard.edu/~cepko/protocol/xgalplap-stain.htm >안녕하세요. SA-beta gal staining에 대해 공부하던 중 궁금한 것이 있어 질문드립니다. >staining시에 넣는 여러가지 시약들의 역할에 대해서 구체적으로 알고싶어 여기저기 뒤져보았는데 찾을 수가 없어서요. > >일단 제가 이해한 것은 cellular senescence시 GLB1이라는 gene이 overexpression되고 이에 의해 만들어지는 GLB1 protein이 beta-galactosidase로써 기질인 X-gal을 분해한다.. 입니다. > >staining의 protocol을 보면 > >6well plate에서 >1. PBS로 2-3회 wasing >2. 3% formaldehyde RT 10min incubation >3. 2를 PBS로 다시 washing >4. stining solution 넣고 Over night(12-16hr) > >인데 staining solution조성을 보면 >1mg/ml X-gal >5mM potassium ferricyanide >5mM potassium ferrocyanide >2mM MgCl2 >150mM NaCl >pH6.0 Citric acid-soium phosphate > >입니다. >X-gal은 기질로서 beta-galactosidase에 의해 분해되어 blue로 발색을 하고, 이때 senescence emzyme specific 하게 반응시키기 위해 Citric acid-soium phosphate 로 pH조절을위해 넣어주는 것으로 이해했습니다. 맞나요? >나머지는 .. 특히 5mM potassium ferricyanide, 5mM potassium ferrocyanide는 왜 첨가하는지 궁금합니다.. ㅜㅜ >
    답변수정
    potassium ferricyanide와 potassium ferrocyanide는 beta gal에 의해 X-gal이 분해된 후에 생성된 colorless indoxyl monomer의 산화 반응에 의한 blue colored precipitates의 생성을 돕는 redox potential의 형성을 위해서 첨가되는 것입니다. 아래의 웹사이트 문서를 참고하세요. http://genepath.med.harvard.edu/~cepko/protocol/xgalplap-stain.htm >안녕하세요. SA-beta gal staining에 대해 공부하던 중 궁금한 것이 있어 질문드립니다. >staining시에 넣는 여러가지 시약들의 역할에 대해서 구체적으로 알고싶어 여기저기 뒤져보았는데 찾을 수가 없어서요. > >일단 제가 이해한 것은 cellular senescence시 GLB1이라는 gene이 overexpression되고 이에 의해 만들어지는 GLB1 protein이 beta-galactosidase로써 기질인 X-gal을 분해한다.. 입니다. > >staining의 protocol을 보면 > >6well plate에서 >1. PBS로 2-3회 wasing >2. 3% formaldehyde RT 10min incubation >3. 2를 PBS로 다시 washing >4. stining solution 넣고 Over night(12-16hr) > >인데 staining solution조성을 보면 >1mg/ml X-gal >5mM potassium ferricyanide >5mM potassium ferrocyanide >2mM MgCl2 >150mM NaCl >pH6.0 Citric acid-soium phosphate > >입니다. >X-gal은 기질로서 beta-galactosidase에 의해 분해되어 blue로 발색을 하고, 이때 senescence emzyme specific 하게 반응시키기 위해 Citric acid-soium phosphate 로 pH조절을위해 넣어주는 것으로 이해했습니다. 맞나요? >나머지는 .. 특히 5mM potassium ferricyanide, 5mM potassium ferrocyanide는 왜 첨가하는지 궁금합니다.. ㅜㅜ >
    김수영(ponicon) 2010-10-18

    감사합니다 ^^ 많은 도움이 되었습니다.

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