2010-10-20
org.kosen.entty.User@19979e8b
서기원(majimotai)
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단백질을 nenaturation 시키지 않고 전기영동을 하려고 함니다.
그래서 native gel을 만들어 사용하려고 하는데, 버퍼 조성이랑 하는 방법 부탁드립니다.
그리고 이를 membrane에 transfer 하여 western 하려고 하는데 역시 단백질 변성없이 가능한가요?.. SDS 가 들어간 방법을 사용하면 안될꺼 같은데.. tansfer 역시 버퍼 조성좀 알려 주셨으면 감사합니다..
SDS PAGE 방법에서 boiling, 그리고 2-ME, SDS 만 빼고 실험하면.. 될까요??
- protein
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답변 2
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답변
이향숙님의 답변
2010-10-21- 0
생각하신 것처럼 수행하시면 됩니다. SDS,2-ME 대신에 DDW를 넣고 reagent, buffer를 제조하시면 됩니다. 그리고 변성을 막기위해서는 저온실이나 cold chamber에서 전기영동을 하면 됩니다. native gel을 western해본적은 없지만.. buffer조성에서 SDS,Tween20을 빼고 만들면 문제는 없을것 같습니다. 도움이 되시길 빕니다. Western부분은 다른 분들이 답변을 보충해주시면 좋겠습니다. >단백질을 nenaturation 시키지 않고 전기영동을 하려고 함니다. >그래서 native gel을 만들어 사용하려고 하는데, 버퍼 조성이랑 하는 방법 부탁드립니다. >그리고 이를 membrane에 transfer 하여 western 하려고 하는데 역시 단백질 변성없이 가능한가요?.. SDS 가 들어간 방법을 사용하면 안될꺼 같은데.. tansfer 역시 버퍼 조성좀 알려 주셨으면 감사합니다.. >SDS PAGE 방법에서 boiling, 그리고 2-ME, SDS 만 빼고 실험하면.. 될까요?? -
답변
박윤희님의 답변
2010-10-26- 0
>단백질을 nenaturation 시키지 않고 전기영동을 하려고 함니다. >그래서 native gel을 만들어 사용하려고 하는데, 버퍼 조성이랑 하는 방법 부탁드립니다. >그리고 이를 membrane에 transfer 하여 western 하려고 하는데 역시 단백질 변성없이 가능한가요?.. SDS 가 들어간 방법을 사용하면 안될꺼 같은데.. tansfer 역시 버퍼 조성좀 알려 주셨으면 감사합니다.. >SDS PAGE 방법에서 boiling, 그리고 2-ME, SDS 만 빼고 실험하면.. 될까요?? non-denaturation PAGE는 내려본적이 있어서 몇자 적어 봅니다. Protein Method 라는 책에 자세히 나와 있습니다. Daniel M. Bollag & Stuart J. Edelstein 이 저자랍니다. 앞의 분이 말씀하신 것처럼 SDS를 빼고 buffer를 만들면 됩니다만 sample buffer 의 조성이 다릅니다. 3.1ml 1M Tris-Cl (pH6.8) - 312.5mM 5ml Glycerol - 50% 0.5ml 1% bromophenol blue - 0.05% 1.4ml DW western은 방법상의 차이는 없을 것 같다는 생각이 들긴 합니다만, 윗분의 말처럼 해보지는 않아서.... transfer buffer 에 protein denaturation과 관련된 시약들은 첨가하지 않고 사용하는 지라 문제 없을 거란 생각이...