2011-02-18
org.kosen.entty.User@7f76788
서기원(majimotai)
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단백질을 박테리아에서 발현한뒤.. 분리한 단백질 사이에 disulfide bond를 형성 시켜 dimer를 만들고 싶습니다. 원래 단백질 자체가 dimer로 disulfide을 가지는 단백질이지만 이종의 host에서 monomer 단백질을 발현시킨 상황이기 때문에 나중에 필요한 작업이라서요.
pH 변화, 산화 및 환원제 처리 같은 물리 화학적 방법 있으면 여러가지 추천 부탁드립니다. 당연히 제거가 힘들다든지 독성이 심한 경우는 배제하고 싶습니다..
- disulfide bond
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
조윤환님의 답변
2011-02-21- 2
큰 도움은 안될 듯 싶지만 들은 것이 있어 알려 드립니다. 우선은 이런 종류의 화학적 처리는 산화제를 이용하면 됩니다. 보통은 H2O2를 사용하는 것으로 압나다. 효소 등의 단백질에서도 동일하고요. 말씀하신 종류의 화학은 일상생활에선 퍼머할 때 접할 수 있습니다. 머리카락의 단백질 구조를 바꾸는 과정이거든요. 시스테인 구조요. 님께서 원하시는 과정의 독성에 대해선 아는 바가 없어서 말씀드리기 어렵고.... 다음의 참고 문헌을 검토해 보시기 바랍니다. 1. An Engineered Pathway for the Formation of Protein Disulfide Bonds Science 20 February 2004: 1185-1189.(DOI:10.1126/science.1092612) 2. http://www.jbc.org/content/279/43/44355.abstract 3. http://www.jbc.org/content/279/21/21749.full.pdf 4. http://precedings.nature.com/documents/734/version/1/files/npre2007734-1.pdf 5. -
답변
김재훈님의 답변
2011-02-24- 0
다른 첨가제 없이도 중성 buffer에서 disulfide bond형성은 일어납니다(용액중 기체 산소에 의해서) 문제는 disulfide bond의 갯수가 몇개냐 하는 점과 heterodimer,homodimer 모두 형성될 수 있다는 점이겠네요. Disulfide bond 1개라면 Tris buffer나 ammonium acetate buffer 이용해서 pH 중성으로 맞추신 후, 4℃나 실온에서 3일정도 놔 두시면 충분히 형성될 것 같습니다. >단백질을 박테리아에서 발현한뒤.. 분리한 단백질 사이에 disulfide bond를 형성 시켜 dimer를 만들고 싶습니다. 원래 단백질 자체가 dimer로 disulfide을 가지는 단백질이지만 이종의 host에서 monomer 단백질을 발현시킨 상황이기 때문에 나중에 필요한 작업이라서요. > pH 변화, 산화 및 환원제 처리 같은 물리 화학적 방법 있으면 여러가지 추천 부탁드립니다. 당연히 제거가 힘들다든지 독성이 심한 경우는 배제하고 싶습니다..