2011-03-18
org.kosen.entty.User@6a5b741b
이미진(myjc7)
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LC/MS 로 methylhistamine std 를 분석하여서
210nm 에서 chromatogram 을 얻었고,
mass spectrum 도 얻었습니다.
3-methylhistamine 을 합성하여서 HPLC로 순도 분석을 해야하는데,
일단, column은 브랜드만 다르고 동일한 C18 coulmn 입니다.
그런데 210nm 파장으로 LC/MS 로 분석할때 사용한 이동상 ACN, water method 를
그대로 HPLC 에 적용해서 분석을 하려하는데
peak 자 확인이 안됩니다.
paper 를 찾아서 여러가지 buffer 를 사용도 해보았지만
조건이 잘 잡히지 않네요,
물론 C18인 다른 브랜드의 colum 으로도 분석을 해봤지만 잘 안되서요.
혹시 methylhistamine 분석조건을 알고 계시면 도움을 좀 요청할까 해서 이렇게
글을 올립니다,
참고로, methylhistamine-2HCl (salt form) 입니다
- HPLC
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답변 3
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답변
조윤환님의 답변
2011-03-21- 0
제 추측입니다만 LC/MS 로 methylhistamine std 를 분석하여 210nm에서 chromatogram 을 얻었다면 브랜드가 다른 C18 coulmn을 사용했다고 해도 methylhistamine std의 peak을 확인할 수 있었어야 합니다. methylhistamine 자체가 basic한 물질이므로 컬럼의 aging 상태에 따라 피크의 형태가 좀 다를 수는 있겠습니다. 게다가 buffer로 분석해도 조건을 잡을 수 없다고 하셨고, methylhistamine-2HCl (salt form)를 사용하셨다고 하셨는데....Std가 염산염이란 말씀인가요? 만약 그렇다면 LC/MS 분석시 피크의 RT가 굉장히 짧았을텐데..... 사실 순도 분석하기엔 좋은 조건은 아니라는 생각이 듭니다. 정보가 부족한 관계로 생각나는데로 적어 봤습니다. -
답변
조윤환님의 답변
2011-03-22- 0
LC/MS 로 methylhistamine std 를 분석한 조건과 동일한 조건에서 브랜드만 다른 동종의 컬럼으로 분석 중인데 상이한 결과를 얻고 있다는 것은 선듯 이해가 되질 않습니다. LC/MS용 컬럼과 일반 HPLC 컬럼의 경우 일반적으론 같은 고정상이라고 봐야 합니다. 물론 같은 C18컬럼이라도 입자의 크기, 세공의 크기, end-capping 여부, base treatment 여부에 따라 상이한 크로마토그램을 얻을 수 있기는 합니다. 하지만 지금까지 여러번 다른 문제로 답변을 드린 경험에 따르면 그러한 부분은 충분히 고려하셨을 걸로 생각합니다. HPLC 실험시 LC/MS 실험 때와 동일한 std를 쓰셨나요? 아니면 합성한 물질은 사용하셨나요? prep-LC로 정제하실 계획인 것으로보아 합성한 물질의 양이 매우 적은가봅니다. 충분한 양을 가지고 계시다면 open column이나 재결정을 통해 1차 정제하시고, prep-LC로 추가 정제하시길 권합니다. amine류 화합물의 경우 이러한 방법으로 정제가 어려울 경우 승화법을 이용해 고순도의 물질을 얻기도 합니다. 참고하세요.
이미진(myjc7) 2011-03-22HPLC column 을 다른 C18으로 실험을 해보니 확인이 되었습니다.
제가 사용했던 column 이 문제였던거 같구요, 동일한 std 를 사용하였구요, open column 으로는 전혀 분리가 안되어서 prep LC 로 혹시 될까 싶어서 조건을 잡아보려하는거거든요,양은 10mg 정도만 얻으면 되구요,
이미진(myjc7) 2011-03-22ACN 을 MeOH 로 바꿔서 다시 조건을 잡고있는데 역시 잘 안되네요, 혹시 제가 하고있는 이 amine 계열의 분석에 좋은 buffer 는 어떤 것들이 있는지 알려주실수있나요??
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답변
이상후님의 답변
2011-03-30- 0
>LC/MS 로 methylhistamine std 를 분석하여서 >210nm 에서 chromatogram 을 얻었고, >mass spectrum 도 얻었습니다. > >3-methylhistamine 을 합성하여서 HPLC로 순도 분석을 해야하는데, >일단, column은 브랜드만 다르고 동일한 C18 coulmn 입니다. > >그런데 210nm 파장으로 LC/MS 로 분석할때 사용한 이동상 ACN, water method 를 >그대로 HPLC 에 적용해서 분석을 하려하는데 >peak 자 확인이 안됩니다. > >paper 를 찾아서 여러가지 buffer 를 사용도 해보았지만 >조건이 잘 잡히지 않네요, >물론 C18인 다른 브랜드의 colum 으로도 분석을 해봤지만 잘 안되서요. > >혹시 methylhistamine 분석조건을 알고 계시면 도움을 좀 요청할까 해서 이렇게 >글을 올립니다, > >참고로, methylhistamine-2HCl (salt form) 입니다 물과 ACN을 굳이 사용하지 않아도 된다면 volatile한 triethylammonium acetate buffer에서 ion-pair reverse chromatography법으로 적용해 보시는 건 어떨까요? 컬럼은 C18을 사용해도 무방할 거 같군요. pH는 7로..
prep-HPLC 로 분리를 해야해서 HPLC 이동상 조건을 buffer 가 아닌것으로 가급적 잡아서 적용시킬수 있을까 해서 ACN과 water 로만 조건을 잡고있습니다.
C18 column 을 150*4.6mm 으로 사용을 하고 있고 RT는 2.5인데 peak 가 broad 하게 나와서 formic acid 를 sample에 살짝 loading 하여서 분석도 해 보았습니다.
peak가 broad 해지는 것은 좀 나아지는데 최적의 condition 은 잡기가 어렵네요,