2011-03-21
org.kosen.entty.User@378b556c
이효지(koko7912)
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논문을 보다보니,
본 논문에서 inflammasome의 activity를 측정할 때
inflammasome의 indicator라고 할 수 있는
caspase-1과 IL-1beta의 발현을 immunoblot으로 측정했습니다.
근데 caspase-1과 IL-1beta의 level을
cell supernatant에서는 pro-caspase-1과 caspase-1 p20, IL-1beta p17을
cell extract에서는 pro-caspase-1과 pro-IL-1beta의 level을 따로 보고 있는데요.
cell supernatant에서 IL-1beta를 보는 것은 이해가 되지만
caspase-1을 supernatant에서 보는 것이 이해가 되질 않습니다.
caspase-1이 secretion되는 것은 본 적이 없는데
왜 caspase-1을 상층액에서 보는걸까요?
그리고 cell supernatant에서 어떻게 protein level을 immunoblot으로 보는 것일까요?
- inflammasome
- caspase-1
- cell supernatant
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
정환석님의 답변
2011-03-23- 0
논문을 봐야하겠지만 저도 왜 caspase-1을 sup에서 측정했는지 모르겠습니다. 하지만 sup에서 western blotting가능합니다. 먼저 sup을 microcon이나 centricon(단백질 농축하는 필터임, target 단백질보다 작은 size를 cut-off하는 membrane을 선택할것)으로 sup을 농축한후 단백질을 정량해 사용하시면 됩니다. 이때 배지는 fbs 없는 배지를 사용하는게 좋을 것입니다. (serum의 양이 많으므로..) > >논문을 보다보니, >본 논문에서 inflammasome의 activity를 측정할 때 >inflammasome의 indicator라고 할 수 있는 >caspase-1과 IL-1beta의 발현을 immunoblot으로 측정했습니다. > >근데 caspase-1과 IL-1beta의 level을 >cell supernatant에서는 pro-caspase-1과 caspase-1 p20, IL-1beta p17을 >cell extract에서는 pro-caspase-1과 pro-IL-1beta의 level을 따로 보고 있는데요. >cell supernatant에서 IL-1beta를 보는 것은 이해가 되지만 >caspase-1을 supernatant에서 보는 것이 이해가 되질 않습니다. >caspase-1이 secretion되는 것은 본 적이 없는데 >왜 caspase-1을 상층액에서 보는걸까요? >그리고 cell supernatant에서 어떻게 protein level을 immunoblot으로 보는 것일까요? > -
답변
김상태님의 답변
2011-05-02- 0
> >논문을 보다보니, >본 논문에서 inflammasome의 activity를 측정할 때 >inflammasome의 indicator라고 할 수 있는 >caspase-1과 IL-1beta의 발현을 immunoblot으로 측정했습니다. > >근데 caspase-1과 IL-1beta의 level을 >cell supernatant에서는 pro-caspase-1과 caspase-1 p20, IL-1beta p17을 >cell extract에서는 pro-caspase-1과 pro-IL-1beta의 level을 따로 보고 있는데요. >cell supernatant에서 IL-1beta를 보는 것은 이해가 되지만 -원래 caps-1은 분비단백질효소로 상등액에 존재하기 때문임 상등액을 추출해서 단백질 확인하기 위해 western blot확인함