2011-03-26
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박미라(hoohoo99)
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안녕하세요.
제가 biotin label 된 probe로 emsa 실험을 하는데요. probe는 biotin modify한것을 주문해서 제가 annealing해서 사용하고 있구요. 실험진행 kit는 thermo 제품을 쓰고 있습니다. 근데 실험하고 나서 보면 membrane에 밴드가 하나도 안나옵니다;;
예전에 다른 oligo로는 실험을 했었거든요.
처음엔 transfer 문제인가 했는데 kit에 있는 positive control은 되구요.
probe 문제인가 생각이 드는데 우선 annealing은 된것 같은데 대체 뭐가 문제인지 모르겠네요. biotin modify가 제대로 안된걸까요?
membrane은 positive charged인 나일론 membrane을 사용했구요.
아시는분 도와주세요 ㅠㅠ
- EMSA
- biotin labeled probe
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답변 2
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답변
신대섭님의 답변
2011-04-05- 0
저도 예전에 똑같은 kit를 사용해 결과를 얻은 경험이 있습니다. Annelling이 잘 되었는지를 먼저 확인해볼 필요가 있을것 같습니다. Probe만 걸어서 확인은 해보셨는지요..Annelling이 잘 되었다면 annelling이 잘 안된 probe와 차이가 있을것 같습니다. -
답변
이희정님의 답변
2011-04-05- 0
>안녕하세요. > >제가 biotin label 된 probe로 emsa 실험을 하는데요. probe는 biotin modify한것을 주문해서 제가 annealing해서 사용하고 있구요. 실험진행 kit는 thermo 제품을 쓰고 있습니다. 근데 실험하고 나서 보면 membrane에 밴드가 하나도 안나옵니다;; >예전에 다른 oligo로는 실험을 했었거든요. > >처음엔 transfer 문제인가 했는데 kit에 있는 positive control은 되구요. >probe 문제인가 생각이 드는데 우선 annealing은 된것 같은데 대체 뭐가 문제인지 모르겠네요. biotin modify가 제대로 안된걸까요? >membrane은 positive charged인 나일론 membrane을 사용했구요. >아마도 플로브의 서열이 안맞아서 그렇지도 모르겟네요 그래서 서열분석을 정확히 하고 annealing조건도 다시 확인후 실험을 하시는 것이 좋을듯 합니다