2011-05-19
org.kosen.entty.User@38b41a53
이미진(myjc7)
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현재 HPLC로 DAICEL chiralpak IC Column 으로 분석을 하고 있습니다.
이동상은 Hx:IPA=98:2 입니다.
처음 분석하였을 때 STD 에서 S-form RT-11.64min
R-form RT-16.74min 이었습니다.
그리고 Blk 찍고 Sample 을 분석하였는데
RT가 1min정도 당겨져서 나왔습니다.
그래서 다시한번 STD를 분석을해보았더니
이번에는 STD 임에도 11.64min보다 1min이나 더 늦게 나왔습니다.
STD를 찍고 바로 STD를 분석을 해도 RT 변화가 굉장히 심합니다.
그리고, Mobile phase 를 다시 만들어서 위와 같이 반속하였는데도
역시 RT 변화가 굉장히 심했습니다,
HPLC 에서 압력은 분석하는 내내 464psi 로 안정하였습니다
RT 변화가 왜 이렇게 심한지 알수 있을까요?
- Chiral
- HPLC
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답변 2
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답변
이상후님의 답변
2011-05-19- 0
>현재 HPLC로 DAICEL chiralpak IC Column 으로 분석을 하고 있습니다. > >이동상은 Hx:IPA=98:2 입니다. > >처음 분석하였을 때 STD 에서 S-form RT-11.64min > R-form RT-16.74min 이었습니다. > >그리고 Blk 찍고 Sample 을 분석하였는데 >RT가 1min정도 당겨져서 나왔습니다. > >그래서 다시한번 STD를 분석을해보았더니 >이번에는 STD 임에도 11.64min보다 1min이나 더 늦게 나왔습니다. >STD를 찍고 바로 STD를 분석을 해도 RT 변화가 굉장히 심합니다. > >그리고, Mobile phase 를 다시 만들어서 위와 같이 반속하였는데도 >역시 RT 변화가 굉장히 심했습니다, > >HPLC 에서 압력은 분석하는 내내 464psi 로 안정하였습니다 > >RT 변화가 왜 이렇게 심한지 알수 있을까요? > 이런 경우는 제일 먼저 pump와 solvent mixing 장치를 확인해 봐야 될 거 같군요.. 아울러 flow rate를 간단한 스톱워치로 계산해 보는 것도 pump와 solvent mixing장치가 원할하게 작동하는지 확인하는 방법입니다. 물론 pump압력이 일정하다고 해도 감지하지 못하는 정도의 오류가 날 수 있기 때문이죠.. 다른 흔한 원인으로는 이동상 조성이나 pH 때문인데 같은 버퍼에서도 이런 현상이 일어난 것으로 보아서 버퍼의 원인은 아닌거 같습니다. 좀 더 생길 수 있는 원인들을 설명하는 자료를 첨부하니 4 page의 2. Variable retention time 부분을 참고하시기 바랍니다. -
답변
조윤환님의 답변
2011-05-23- 0
DAICEL chiralpak IC Column은 폴리사카라이드 고정화 컬럼입니다. RT 변화의 원인은 앞서 답변하신분의 말씀처럼 펌프의 오작동일 가능성이 높습니다. 다른 가능성으론 컬럼 자체의 물리적 손상이 발생하였을 경우 입니다. chiral 컬럼 사용시 가장 주의해야할 점 중에 하나는 압력에 관련된 것입니다. 압력이 급격히 상승할 경우 물리적 손상이 일어나기 쉽기 때문입니다. chiral 컬럼의 경우 고정상이 실리카 입자에 화학적 결합을 이루고 있는 경우 보다는 단순히 코팅되어 있는 경우가 꽤 많기 때문이죠. 초심자들이 저지르기 쉬운 실수 중 하나는 유속을 한꺼번에 올리는 것입니다. 순식간에 컬럼이 망가지죠. 물론 컬럼의 세척이나 용매 전환 등이 부적절하게 이루어질 경우에도 손상이 일어날 수 있지만 정확한 정황은 질문자께서 가장 잘 아시리라 생각합니다. 펌프를 점검하셔서 문제가 없다면 컬럼 손상이 일어난 것으로 생각하시면 맞을 겁니다. 이 경우 컬럼을 공급대리점에 보내서 점검을 받아 보시기 바랍니다. 세척이나 사용가능 여부 진단 등을 해줍니다.