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rezasurin 사용법 및 혐기배양 문의

2011-06-16 org.kosen.entty.User@6e920740 김경록(krkim)
  • 1
안녕하세요 저는 고온성 혐기균을 배양하고자 하는데 실제 배지 제조 과정에서 의문이 생겨 문의드립니다. 혐기균 배양 시 사용되는 rezasurin은 산소존재 시 또는 산화환원전위가 일정수준이상으로 증가할 시 pink로 변한다고 하는데 제 균주는 Spirochaete라는 고온성 균주로 DSM에서 분양받았읍니다. 제 의문은 1. DSM의 protocol에 따라 질소를 불어넣어 주어 산소를 최대한 제거한 후 resazurin을 넣고 끓임; 식힐 때도 질소 첨가, protocol에는 pink로 된다고 하는데 파란색이 됨 2. Serum vial에 butyl rubber로 tight하게 밀봉한 후 멸균 3. autoclave후 (여전히 pink) 환원제를 넣으라고 해서 멸균 후 anaerobic chamber에서 환원제 추가해도 여전히 pink색임 제 질문은 resazurin을 잘 못 쓴 것인지 아니면 환원제가 한가지 밖에서 없어서 더 추가로 넣어주어야 할지 아니면 상기과정 중 제가 인지하지 못하는 실수가 있는 것인지입니다. 경험자분들의 고견 부탁드립니다. 미리 감사합니다. 아니면
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답변 1
  • 답변

    박수제님의 답변

    2011-06-16
    • 2
    안녕하세요. 혐기성균배양이 어렵죠... 우선 resazurine은 잘 사용하고 계시고요. 핑크로 변하는 것 보다는 파란색이 사라져서 하얀색으로 되어야 하는데요. 끓이는 방법도 괜찮은데요.. 우선 예상되는 것은 어떤 환원제를 사용하셨는지 궁금하네요. 약한 환원제라면.. purging을 오래 하셔야 하거든요... 이런 방법도 가능합니다. 1. 배양액을 만들어서 질소로 purging을 합니다. 10분정도 하시고요. pH 변화는 버퍼등이 있다면 심하게 변하진 않습니다. 물론 이 배양액에는 resazurine이 들어있겠죵? 2. 환원제 중 하나인 Na2S를 약 10ul정도 넣습니다. (1M짜리의) 3. Na2S를 넣으면서 buttyl rubber stopper로 닫고 시간이 조금 지나면 하얀색으로 변하는 것을 관찰하실 수 있으실꺼예요. 4. 만약 하얀색으로 변했는데.. 다시 시간이 지나서 핑크색으로 되면... 이건. 혐기적 조건이 만들어지지 않았다고 보시면 됩니다. 도움이 되길 바랍니다. >안녕하세요 > >저는 고온성 혐기균을 배양하고자 하는데 >실제 배지 제조 과정에서 의문이 생겨 문의드립니다. > >혐기균 배양 시 사용되는 rezasurin은 산소존재 시 또는 산화환원전위가 일정수준이상으로 증가할 시 pink로 변한다고 하는데 > >제 균주는 Spirochaete라는 고온성 균주로 DSM에서 분양받았읍니다. > >제 의문은 > >1. DSM의 protocol에 따라 질소를 불어넣어 주어 산소를 최대한 제거한 후 resazurin을 넣고 끓임; 식힐 때도 질소 첨가, protocol에는 pink로 된다고 하는데 파란색이 됨 > >2. Serum vial에 butyl rubber로 tight하게 밀봉한 후 멸균 > >3. autoclave후 (여전히 pink) 환원제를 넣으라고 해서 >멸균 후 anaerobic chamber에서 환원제 추가해도 여전히 pink색임 > > >제 질문은 resazurin을 잘 못 쓴 것인지 아니면 환원제가 한가지 밖에서 없어서 더 추가로 넣어주어야 할지 아니면 상기과정 중 제가 인지하지 못하는 실수가 있는 것인지입니다. > >경험자분들의 고견 부탁드립니다. > >미리 감사합니다. >아니면
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    안녕하세요. 혐기성균배양이 어렵죠... 우선 resazurine은 잘 사용하고 계시고요. 핑크로 변하는 것 보다는 파란색이 사라져서 하얀색으로 되어야 하는데요. 끓이는 방법도 괜찮은데요.. 우선 예상되는 것은 어떤 환원제를 사용하셨는지 궁금하네요. 약한 환원제라면.. purging을 오래 하셔야 하거든요... 이런 방법도 가능합니다. 1. 배양액을 만들어서 질소로 purging을 합니다. 10분정도 하시고요. pH 변화는 버퍼등이 있다면 심하게 변하진 않습니다. 물론 이 배양액에는 resazurine이 들어있겠죵? 2. 환원제 중 하나인 Na2S를 약 10ul정도 넣습니다. (1M짜리의) 3. Na2S를 넣으면서 buttyl rubber stopper로 닫고 시간이 조금 지나면 하얀색으로 변하는 것을 관찰하실 수 있으실꺼예요. 4. 만약 하얀색으로 변했는데.. 다시 시간이 지나서 핑크색으로 되면... 이건. 혐기적 조건이 만들어지지 않았다고 보시면 됩니다. 도움이 되길 바랍니다. >안녕하세요 > >저는 고온성 혐기균을 배양하고자 하는데 >실제 배지 제조 과정에서 의문이 생겨 문의드립니다. > >혐기균 배양 시 사용되는 rezasurin은 산소존재 시 또는 산화환원전위가 일정수준이상으로 증가할 시 pink로 변한다고 하는데 > >제 균주는 Spirochaete라는 고온성 균주로 DSM에서 분양받았읍니다. > >제 의문은 > >1. DSM의 protocol에 따라 질소를 불어넣어 주어 산소를 최대한 제거한 후 resazurin을 넣고 끓임; 식힐 때도 질소 첨가, protocol에는 pink로 된다고 하는데 파란색이 됨 > >2. Serum vial에 butyl rubber로 tight하게 밀봉한 후 멸균 > >3. autoclave후 (여전히 pink) 환원제를 넣으라고 해서 >멸균 후 anaerobic chamber에서 환원제 추가해도 여전히 pink색임 > > >제 질문은 resazurin을 잘 못 쓴 것인지 아니면 환원제가 한가지 밖에서 없어서 더 추가로 넣어주어야 할지 아니면 상기과정 중 제가 인지하지 못하는 실수가 있는 것인지입니다. > >경험자분들의 고견 부탁드립니다. > >미리 감사합니다. >아니면
    김경록(krkim) 2011-06-17

    답변 감사합니다. 환원제는 Na2S.9H2O 한가지만 있는 것 같고 3% (w/v) stock이 10mL/L 들어가네요. 배지는 DSM 509 배지입니다. 여기에 Na2SeO3.5H2O 와 Na2WO4.2H2O가 들어가는데 이것이 환원제인지는 잘 모르겠네요

    박수제(pgpoch) 2011-06-17

    Se, W는 trace element 입니다. 이건 환원제는 아니고요... 3%라는 것이 어느 정도 농도인지 제가 계산을 안해봐서 모르겠습니다만... purging을 좀 많이 해보시고요..N2 gas의 조성과 비율을 살펴보시는 것이 좋을 것 같습니다.

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